反應(yīng)五要素:
轉(zhuǎn)基因植物PAT基因核酸檢測試劑盒方法參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶,、dNTP,、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度,。理論上,，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增,。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右,。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜,，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜,，G+C太少擴增效果不佳,，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布,，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列,。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補,，特別是3'端的互補,，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶,。
⑤引物3'端的堿基,，特別是末及倒數(shù)第二個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對,，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗,。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點,， 這對酶切分析或分子克隆很有好處,。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol,，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會,。

使用及效果：
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子（約1/4 黃豆大小）或直徑約為0.5-0.7 cm（或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中，95℃保溫10-15 分鐘,，加入0.1 mL 溶液B,，混勻，直接取上清液（相當(dāng)于PCR 體積的1/10）作為模板進(jìn)行PCR,。剩余樣品可以放4℃保存,。

樣本采集、存放及運輸：
1,、樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集,；
2、存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h,，-70℃以下可長期保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（zui多凍融3次）；
3,、運輸：采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運輸,。
普通PCR反應(yīng)流程:
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自備物品：
轉(zhuǎn)基因植物PAT基因核酸檢測試劑盒方法15毫升錐形離心管：用于制備樣品的容器
比色皿：用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板：用于比色的容器
分光光度儀：用于比色分析
酶標(biāo)儀：用于微量樣品比色分析
儲存條件：
14℃或－20℃
準(zhǔn)備物品
清理液（A）                                   毫升
染色液（t B）                                   微升
稀釋液（C）                                   毫升
溶解液（tD）                                   毫升
產(chǎn)品說明書                                   1份

6-氯-4-羥喹啉分子式：179.6分子量： C9H6ClNO英文名稱：6- -4- hydroxy groupCAS號：23432-43-1

5-氟胞嘧分子式：129.09分子量： C4H4FN3O英文名稱：5- fluorocytosineCAS號：2022-85-7

乙氧嘧磺隆英文名稱：Ethoxy sulfometuronmethylCAS號：126801-58-9分子式：398.39分子量： C15H18N4O7S

鄰三酚紅英文名稱：The adjacent benzene three phenol redCAS號：32638-88-3分子式：400.36分子量： C19H12O8S

直接綠BE英文名稱：Direct green BECAS號：分子式：分子量：

聚對二甲分子式：分子量：英文名稱：ParyleneCAS號：

阿利多分子式：251.28分子量： C13H17NO4英文名稱：AlibendolCAS號：26750-81-2

1,4-二溴-2,5-二氟分子式：271.88分子量： C6H2Br2F2英文名稱：1,4- two - dibromo -2,5-CAS號：327-51-5

4-溴乙酰聯(lián)分子式：275.15分子量： C14H11BrO英文名稱：4- bromideCAS號：135-73-9

鉍鉀分子式：1253.7分子量： BiI3·4KI英文名稱：Bismuth potassium iodideCAS號：41944-01-8

2-甲-5-硝對二胺英文名稱：2- methyl -5- nitro group twoCAS號：25917-89-9分子式：167.17分子量： C7H9N3O2

轉(zhuǎn)基因植物PAT基因核酸檢測試劑盒方法CASPR/Neurexin4  軸突蛋白4/少突膠質(zhì)細(xì)胞抗體 0.2ml

CDH11/OB-Cadherin  鈣粘附蛋白-11抗體 0.1ml

C16orf61  16號染色體開放閱讀框61抗體 0.2ml

Myosin-XVIIIb  肌球蛋白XVIIIb抗體 0.2ml

FNDC2/5  Ⅲ型纖維連接蛋白域蛋白2/5抗體 0.2ml

Rabbit Anti-Goat IgG/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗羊IgG 0.1ml

Goat Anti-rat IgG  羊抗大鼠IgG 1mg

Sema7A/CD108  軸突生長因子CD108抗體 0.2ml

TPST1  酪蛋白硫酸轉(zhuǎn)移酶1抗體 0.2ml

HCN2  鉀/鈉超極化激活環(huán)核苷酸門控通道蛋白2抗體 0.2ml

UGCG/Ceramide glucosyltransferase  葡萄糖神經(jīng)酰胺合成酶抗體 0.1ml

RNF186  環(huán)指蛋白186抗體 0.2ml