詳細(xì)介紹
反應(yīng)五要素:
猿猴錐蟲PCR檢測(cè)試劑盒多少錢參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物,、酶、dNTP,、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度,。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,,常用為20bp左右,。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段,。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶,。ATGC隨機(jī)分布,,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),,避免兩條引物間互補(bǔ),,特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶,。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),,以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn),, 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn),, 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性,。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì),。
使用及效果:
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子(約1/4 黃豆大小)或直徑約為0.5-0.7 cm(或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中,,95℃保溫10-15 分鐘,,加入0.1 mL 溶液B,混勻,,直接取上清液(相當(dāng)于PCR 體積的1/10)作為模板進(jìn)行PCR,。剩余樣品可以放4℃保存。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 分類 |
猿猴錐蟲PCR檢測(cè)試劑盒多少錢 | 50T | PCR檢測(cè)試劑盒 |
樣本采集,、存放及運(yùn)輸:
1,、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集,;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h,,-70℃以下可長(zhǎng)期保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(zui多凍融3次);
3,、運(yùn)輸:采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸,。
普通PCR反應(yīng)流程:
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自備物品:
猿猴錐蟲PCR檢測(cè)試劑盒多少錢15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析
儲(chǔ)存條件:
14℃或-20℃
準(zhǔn)備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
猿猴錐蟲PCR檢測(cè)試劑盒多少錢Rabbit Anti-Bovine IgM/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗牛IgM 0.1ml
TPH/Trptophan Hydroxylase 色氨酸羥化酶抗體 0.2ml
PSMD10/Proteasome 26S S10 蛋白酶調(diào)解因子10抗體 0.2ml
P95/NBS1 DNA修復(fù)蛋白NBS1抗體 0.2ml
ELL 聚合酶延伸因子抗體 0.2ml
COL4A3BP IV型膠原α3結(jié)合蛋白抗體 0.2ml
POLA2 DNA聚合酶α2抗體 0.2ml
DFF-40beta/CAD/CPAN Caspase 激活的脫氧核糖核酸酶抗體 0.1ml
ERN2 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)核信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白2抗體 0.2ml
Kappa-casein/CSN3 κ-酪蛋白抗體 0.2ml
phospho-PI3K/PIK3CD(Tyr524) 磷酸化磷脂酰肌醇激酶催化亞單位D抗體 0.1ml
MrpL12 線粒體核糖體蛋白L12抗體 0.1ml