人原代胎盤(pán)微血管內(nèi)皮細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基公司正在出售的產(chǎn)品：AsPC-1人轉(zhuǎn)移胰腺腺癌細(xì)胞 AsPC-1 human metastatic pancreatic adenocarcinoma cells 1640+10% Hyclone滅活血清 Sf-21(昆蟲(chóng)細(xì)胞) A549/DDP, 人肺腺癌耐藥細(xì)胞株 小細(xì)胞肺癌細(xì)胞,LIEP-P細(xì)胞 DT40(雞淋巴瘤細(xì)胞 熒光標(biāo)記 細(xì)胞培養(yǎng)基 小鼠原

人原代胎盤(pán)微血管內(nèi)皮細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基

注意事項(xiàng)

僅限科研用,。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì),，請(qǐng)不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低,，如有接觸,，立即用自來(lái)水沖洗即可。

復(fù)蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預(yù)熱到 37℃,；

2) 準(zhǔn)備一支 15ml 離心管,，加入 5ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基，放入 37℃水浴鍋中預(yù)熱,；

3) 戴上護(hù)目鏡,，厚毛線(xiàn)手套后，從液氮罐中取出要復(fù)蘇的細(xì)胞,，盡快轉(zhuǎn)入 37℃恒溫水浴鍋中

復(fù)溫晃動(dòng)凍存管以提高復(fù)溫速率,；

4) 將融化了的凍存管中的細(xì)胞吸入事先準(zhǔn)備的離心管中，混勻后,，1000rpm 離心 5min,；

5) 準(zhǔn)備一個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶，寫(xiě)上細(xì)胞名稱(chēng),、日期,，再加入 4ml 培養(yǎng)基；

6) 離心完成后棄去上清,，用 1ml 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后,，轉(zhuǎn)入 T-25 細(xì)胞培養(yǎng)中，混勻后轉(zhuǎn)入

CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置,。

傳代 （細(xì)胞傳代建議一傳二）

1) 當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到 85%以上時(shí),，可進(jìn)行傳代。

2) 在生物安全柜內(nèi),，打開(kāi)培養(yǎng)瓶瓶口,，收集瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基；

3) 向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入 3ml 無(wú)菌的 1×PBS 后，水平放置培養(yǎng)瓶,，使PBS 能夠浸潤(rùn)到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積,，吸棄 PBS；

4) 向瓶?jī)?nèi)加入消化液 1ml,，浸潤(rùn)底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min,；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓飄起，若全部消化下來(lái)則直接向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中,，將懸液吸入 15ml 離心管,；

① 準(zhǔn)備一個(gè)無(wú)菌的 15ml 離心管，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基,；

② 將消化下來(lái)的細(xì)胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打③）,；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右，輕拍培養(yǎng)瓶,，95%左右細(xì)胞脫,。

6) 1000rpm 離心 5min；

7) 準(zhǔn)備兩個(gè)新的 T-25 培養(yǎng)瓶,，各加入 4ml培養(yǎng)基,。

8) 離心完成后，棄上清,，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細(xì)胞,，將重懸后的細(xì)胞轉(zhuǎn)入 2 個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶，每個(gè)培養(yǎng)瓶各 1ml,；

9) 水平放置培養(yǎng)瓶,，震蕩混勻后，將培養(yǎng)瓶置于 37℃,，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),。 

凍存 （細(xì)胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后，棄上清,，用 1mL 凍存液重懸細(xì)胞沉淀,，然后轉(zhuǎn)入 1.8ml 凍存管中；

8）將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿(mǎn)異丙醇的程序降溫盒中,，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過(guò)夜降溫,；

9）第二天，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管,，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存,。

?無(wú)菌操作?：細(xì)胞培養(yǎng)需在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行，使用前需對(duì)超凈工作臺(tái)進(jìn)行紫外線(xiàn)照射滅菌,，定期清潔培養(yǎng)箱,。實(shí)驗(yàn)人員需更換工作服,、鞋套,，戴口罩,、手套。

?器材滅菌?：玻璃器皿,、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌,，塑料制品則多選擇環(huán)氧乙烷滅菌或購(gòu)買(mǎi)已滅菌產(chǎn)品。

?試劑選擇?：所用培養(yǎng)液,、血清,、緩沖液等試劑應(yīng)無(wú)菌、無(wú)污染,，使用前需進(jìn)行無(wú)菌檢測(cè),。不同細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)液成分要求有差異，應(yīng)按細(xì)胞類(lèi)型選擇合適培養(yǎng)液,。

?培養(yǎng)條件?：多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞適宜培養(yǎng)溫度為37℃,，偏差應(yīng)控制在±0.5℃。培養(yǎng)箱應(yīng)保持良好密封性,，定期檢查氣體濃度與流量,，細(xì)胞培養(yǎng)通常需5%CO2以維持培養(yǎng)液pH值穩(wěn)定。培養(yǎng)箱內(nèi)濕度應(yīng)保持在95%左右,。

?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),、生長(zhǎng)狀態(tài)與培養(yǎng)液顏色變化。

?定期檢測(cè)?：定期對(duì)細(xì)胞進(jìn)行支原體,、細(xì)菌,、真菌等污染檢測(cè)。

IL-5 peptide 白細(xì)胞介素5抗原 0.5mgIL-5 peptide 白細(xì)胞介素5抗原

AIF1 Protein Human 重組人 IBA1 / AIF1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

IFNAR1重組食蟹猴 IFNAR1 / IFNAR 蛋白 Protein

DDR1 Protein Mouse 重組小鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 蛋白

CNTF重組人 CNTF 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

小鼠顆粒酶A(Gzms-A)ELISA 試劑盒

Rat ai alpha fodrin aibody IgG/IgA (-Fodrin IgG/IgA) ELISA Kit 大鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA(α-Fodrin IgG/IgA)試劑盒

Humanglycosylatedserumprotein,GSPELISAKit 人糖化蛋白(GSP)試劑盒 進(jìn)口分裝

HumanAlpha-fetoprotein,AFP試劑盒人甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)試劑盒

植物半胱(cysteine)含量高效液相色譜法定量試劑盒20次

Monkeyβ2-microglobulin,BMG/β2-MGELISAKit猴β2微球蛋白(BMG/β2-MG)試劑盒

致病性大腸桿菌(EPEC)核酸試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?/span>)   48T

單增李斯特菌(LM)核酸試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?/span>)   48T

球菌(SA)核酸試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?/span>)   48T

甲型副氏菌(SPA)核酸試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?/span>)   48T

豬β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA 試劑盒

Human ai alpha fodrin aibody IgG/IgA (-Fodrin IgG/IgA) ELISA Kit 人抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA(α-Fodrin IgG/IgA)試劑盒

Porcineierleukin3,IL-3ELISAKit 豬白介素3(IL-3)試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforAhCGAb(Humanai-chorionicgonadoopin-aibody)ELISAKit人抗人絨毛膜抗體

血液牛病毒性腹瀉病毒II型(BovineViralDiarrhoeaVirus-2;BVDV-2)定量PCR擴(kuò)增試劑盒20次

MouseTumornecrosisfactorα,TNF-αELISAKit小鼠壞死因子α(TNF-α)試劑盒

20號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框196抗體

蛋白激酶C結(jié)合蛋白NELL2抗體

人原代胎盤(pán)微血管內(nèi)皮細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基IFNAR1重組食蟹猴 IFNAR1 / IFNAR 蛋白 Protein

IL-5 peptide 白細(xì)胞介素5抗原 0.5mgIL-5 peptide 白細(xì)胞介素5抗原

CNTF重組人 CNTF 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

AIF1 Protein Human 重組人 IBA1 / AIF1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

DDR1 Protein Mouse 重組小鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 蛋白