人原代肝竇內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基公司正在出售的產(chǎn)品：Ana-1 小鼠巨噬細胞 SK-N-SH, 人神經(jīng)母細胞瘤細胞 PRC1 Others Human 人 PRC1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 MAP2K2 Others Human 人 MEK2 / MAP2K2 / MKK2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 豬肝星狀細胞永生化細胞培養(yǎng)基 小鼠原代舌表皮細胞培養(yǎng)基

人原代肝竇內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基

人原代肝竇內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基由團隊精心優(yōu)化，經(jīng)過長期測試,，本產(chǎn)品可保持人原代肝竇內(nèi)皮細胞最佳的生長狀態(tài),。

本產(chǎn)品中已包含人原代肝竇內(nèi)皮細胞生長所需的各種成分，無需添加任何成分,，可直接用于人原代肝竇內(nèi)皮細胞的培養(yǎng),。

 

注意事項

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對人體健康有害的物質(zhì),，請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部,；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可,。

復(fù)蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預(yù)熱到 37℃,；

2) 準備一支 15ml 離心管，加入 5ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基,，放入 37℃水浴鍋中預(yù)熱,；

3) 戴上護目鏡，厚毛線手套后,，從液氮罐中取出要復(fù)蘇的細胞,，盡快轉(zhuǎn)入 37℃恒溫水浴鍋中

復(fù)溫晃動凍存管以提高復(fù)溫速率；

4) 將融化了的凍存管中的細胞吸入事先準備的離心管中,，混勻后,，1000rpm 離心 5min；

5) 準備一個 T-25 培養(yǎng)瓶,，寫上細胞名稱,、日期，再加入 4ml 培養(yǎng)基,；

6) 離心完成后棄去上清,，用 1ml 培養(yǎng)基重懸細胞后，轉(zhuǎn)入 T-25 細胞培養(yǎng)中,，混勻后轉(zhuǎn)入

CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置,。

傳代 （細胞傳代建議一傳二）

1) 當(dāng)細胞匯合度達到 85%以上時，可進行傳代,。

2) 在生物安全柜內(nèi),，打開培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶內(nèi)的培養(yǎng)基,；

3) 向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入 3ml 無菌的 1×PBS 后,，水平放置培養(yǎng)瓶，使PBS 能夠浸潤到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積,，吸棄 PBS,；

4) 向瓶內(nèi)加入消化液 1ml，浸潤底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min,；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細胞是否變圓飄起,，若全部消化下來則直接向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中，將懸液吸入 15ml 離心管,；

① 準備一個無菌的 15ml 離心管,，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基；

② 將消化下來的細胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打③）；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右,，輕拍培養(yǎng)瓶,，95%左右細胞脫。

6) 1000rpm 離心 5min,；

7) 準備兩個新的 T-25 培養(yǎng)瓶,，各加入 4ml培養(yǎng)基。

8) 離心完成后,，棄上清,，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細胞，將重懸后的細胞轉(zhuǎn)入 2 個 T-25 培養(yǎng)瓶,，每個培養(yǎng)瓶各 1ml,；

9) 水平放置培養(yǎng)瓶，震蕩混勻后,，將培養(yǎng)瓶置于 37℃,，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。 

凍存 （細胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后,，棄上清,，用 1mL 凍存液重懸細胞沉淀，然后轉(zhuǎn)入 1.8ml 凍存管中,；

8）將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過夜降溫,；

9）第二天,，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存,。

rh-EGF(Recombinant Epidermal growth factor 0.1mgrh-EGF(Recombinant Epidermal growth factor)

CGA Protein Human 重組人 FSH alpha / TSH alpha / CGA 蛋白

HA重組甲型流感 H9N2 (A/Guinea fowl/Hong Kong/WF10/99) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

HMGB1 Protein Human 重組人 HMGB1 / HMG1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

SERPINF2重組人 SerpinF2 / SERPINF2 蛋白 Protein

小鼠硫氧還蛋白還原酶(xR)ELISA 試劑盒

Neuroophic factor of rat glial cell line derived (GDNF) ELISA Kit 大鼠膠質(zhì)細胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)試劑盒

Humanneurofilameprotein,NFELISAKit 人神經(jīng)絲蛋白(NF)試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanactivatedproteinC,APC試劑盒人活化蛋白C(APC)試劑盒規(guī)格：96T/48T

脂質(zhì)過氧化物反式十八碳四烯酸(cis-parinaricacid)ELISA定量測定試劑盒48/96次

MouseAngiotensinconveingenzyme,ACEELISAKit小鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠特異生長因子/相關(guān)因子(TSGF)試劑盒   96T/48T

小鼠壞死因子樣弱凋亡因子（TWEAK）試劑盒   96T/48T

小鼠壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體4(AIL-R4)試劑盒   96T/48T

小鼠壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體3(AIL-R3)試劑盒   96T/48T

小鼠天門冬酸基轉(zhuǎn)移酶(AST)試劑盒 96T/48T

Human chondroitin sulfate (CS) ELISA Kit 人軟骨素(CS)試劑盒

HumanMannoseELISAKit 人甘露糖(Mannose)試劑盒 96T/48T 進口分裝

ChickenansformingGrowthfactorβ2,TGF-β2試劑盒雞轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGF-β2)試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細胞RyR受體蛋白表達熒光顯微鏡試劑盒10/20次

Mouseesogen,EELISAKit小鼠雌激素(E)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織蛋白酶H輕連抗體

雌酮-3-葡糖苷酸抗體

人原代肝竇內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基HA重組甲型流感 H9N2 (A/Guinea fowl/Hong Kong/WF10/99) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

rh-EGF(Recombinant Epidermal growth factor 0.1mgrh-EGF(Recombinant Epidermal growth factor)

SERPINF2重組人 SerpinF2 / SERPINF2 蛋白 Protein

CGA Protein Human 重組人 FSH alpha / TSH alpha / CGA 蛋白

HMGB1 Protein Human 重組人 HMGB1 / HMG1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

?無菌操作?：細胞培養(yǎng)需在無菌環(huán)境下進行,，使用前需對超凈工作臺進行紫外線照射滅菌，定期清潔培養(yǎng)箱,。實驗人員需更換工作服,、鞋套，戴口罩,、手套,。

?器材滅菌?：玻璃器皿、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌,，塑料制品則多選擇環(huán)氧乙烷滅菌或購買已滅菌產(chǎn)品,。

?試劑選擇?：所用培養(yǎng)液、血清,、緩沖液等試劑應(yīng)無菌,、無污染，使用前需進行無菌檢測。不同細胞對培養(yǎng)液成分要求有差異,，應(yīng)按細胞類型選擇合適培養(yǎng)液,。

?培養(yǎng)條件?：多數(shù)哺乳動物細胞適宜培養(yǎng)溫度為37℃，偏差應(yīng)控制在±0.5℃,。培養(yǎng)箱應(yīng)保持良好密封性,，定期檢查氣體濃度與流量，細胞培養(yǎng)通常需5%CO2以維持培養(yǎng)液pH值穩(wěn)定,。培養(yǎng)箱內(nèi)濕度應(yīng)保持在95%左右,。

?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細胞形態(tài)、生長狀態(tài)與培養(yǎng)液顏色變化,。

?定期檢測?：定期對細胞進行支原體,、細菌、真菌等污染檢測,。