小鼠原代骨髓肥大細(xì)胞專用培養(yǎng)基公司正在出售的產(chǎn)品：C3H/10T1/2, Clone 8(小鼠胚胎成纖維細(xì)胞) 人支氣管平滑肌細(xì)胞HBSMC MRC-5(人胚肺成纖維細(xì)胞 ) HA Others H7N7 甲型流感 H7N7 (A/Netherlands/219/03) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 鴨原代胚胎成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基 狗原代皮下微血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基

小鼠原代骨髓肥大細(xì)胞專用培養(yǎng)基

小鼠原代骨髓肥大細(xì)胞培養(yǎng)基由團(tuán)隊精心優(yōu)化,，經(jīng)過長期測試,，本產(chǎn)品可保持小鼠原代骨髓肥大細(xì)胞優(yōu)良的生長狀態(tài)。

本產(chǎn)品中已包含小鼠原代骨髓肥大細(xì)胞生長所需的各種成分,，無需添加任何成分，可直接用于小鼠原代骨髓肥大細(xì)胞的培養(yǎng)。

 

注意事項(xiàng)

僅限科研用,。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對人體健康有害的物質(zhì)，請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部,；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低,，如有接觸，立即用自來水沖洗即可,。

復(fù)蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預(yù)熱到 37℃,；

2) 準(zhǔn)備一支 15ml 離心管,，加入 5ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基，放入 37℃水浴鍋中預(yù)熱,；

3) 戴上護(hù)目鏡,，厚毛線手套后，從液氮罐中取出要復(fù)蘇的細(xì)胞,，盡快轉(zhuǎn)入 37℃恒溫水浴鍋中

復(fù)溫晃動凍存管以提高復(fù)溫速率,；

4) 將融化了的凍存管中的細(xì)胞吸入事先準(zhǔn)備的離心管中，混勻后,，1000rpm 離心 5min,；

5) 準(zhǔn)備一個 T-25 培養(yǎng)瓶，寫上細(xì)胞名稱,、日期,，再加入 4ml 培養(yǎng)基；

6) 離心完成后棄去上清,，用 1ml 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后,，轉(zhuǎn)入 T-25 細(xì)胞培養(yǎng)中，混勻后轉(zhuǎn)入

CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置,。

傳代 （細(xì)胞傳代建議一傳二）

1) 當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到 85%以上時,，可進(jìn)行傳代。

2) 在生物安全柜內(nèi),，打開培養(yǎng)瓶瓶口,，收集瓶內(nèi)的培養(yǎng)基；

3) 向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入 3ml 無菌的 1×PBS 后,，水平放置培養(yǎng)瓶,，使PBS 能夠浸潤到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積，吸棄 PBS,；

4) 向瓶內(nèi)加入消化液 1ml,，浸潤底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓飄起,，若全部消化下來則直接向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中,，將懸液吸入 15ml 離心管；

① 準(zhǔn)備一個無菌的 15ml 離心管,，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基,；

② 將消化下來的細(xì)胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打③）；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右,，輕拍培養(yǎng)瓶,，95%左右細(xì)胞脫,。

6) 1000rpm 離心 5min；

7) 準(zhǔn)備兩個新的 T-25 培養(yǎng)瓶,，各加入 4ml培養(yǎng)基,。

8) 離心完成后，棄上清,，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細(xì)胞,，將重懸后的細(xì)胞轉(zhuǎn)入 2 個 T-25 培養(yǎng)瓶，每個培養(yǎng)瓶各 1ml,；

9) 水平放置培養(yǎng)瓶,，震蕩混勻后，將培養(yǎng)瓶置于 37℃,，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),。 

凍存 （細(xì)胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后，棄上清,，用 1mL 凍存液重懸細(xì)胞沉淀，然后轉(zhuǎn)入 1.8ml 凍存管中,；

8）將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中,，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過夜降溫；

9）第二天,，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管,，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存。

腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)重組蛋白 Recombinant Brain Derived Neurotrophic Factor (BDNF)

CDK4 Protein Human 重組人 CDK4 / CMM3 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

EGFR重組人 EGFR / HER1 / ErbB1 蛋白 Protein

NA Protein H7N9 重組甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) 神經(jīng)酸酶 (Neuraminidase / NA) (高活性)

GABARAP重組人 GABARAP / Apg8p1 蛋白 (His & MBP 標(biāo)簽) Protein

小鼠白介素23(IL-23)ELISA 試劑盒

People deoxidizing urine three phosphoric acid (DP) ELISA Kit 人脫氧尿三0酸(DP)試劑盒

HumanCalcitonin,CTELISAKit 人降鈣素(CT)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humancarcinoembryonicaign,CEA試劑盒人癌胚抗原(CEA/CD66)試劑盒規(guī)格：96T/48T

重組腺病毒效價比色法定量試劑盒50次

HumansolubleClusterofdiffereiation86,sCD86ELISAKit人可溶性CD86(B7-2/sCD86)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子/CD147   英文名稱：   mouse Exacellular Maix Metalloproteinase Inducer /CD147   規(guī)格：      英文縮寫：   EMMPRIN/CD147

小鼠抗可提取核抗原抗體ENA抗體   英文名稱：   Mouse Exactable Nuclear Aibody   規(guī)格：      英文縮寫：   ENA

小鼠β內(nèi)啡肽   英文名稱：   Beta-Endorphin   規(guī)格：      英文縮寫：   β-EP

小鼠表皮生長因子   英文名稱：   epidermal growth factor-like growth factor   規(guī)格：      英文縮寫：   EGF

小鼠胃腸癌標(biāo)志物CA199ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat bone morphogenetic protein receptor II (BMPR- II) ELISA Kit 大鼠骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)試劑盒

Humanornithinecarbamoylansferase,OCTELISAKit 人鳥氨基甲酰轉(zhuǎn)移酶(OCT)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

ChickenIerleukin3,IL-3試劑盒雞白介素3(IL-3)試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細(xì)胞IGF蛋白表達(dá)熒光顯微鏡試劑盒10/20次

MouseGlucose-dependeinsulin-releasingpolypeptide,GIPELISAKit小鼠葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)試劑盒規(guī)格：96T/48T

c-fos重組兔單克隆抗體

肝細(xì)胞生長因子激活蛋白/HGF activator抗體

小鼠原代骨髓肥大細(xì)胞專用培養(yǎng)基EGFR重組人 EGFR / HER1 / ErbB1 蛋白 Protein

腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)重組蛋白 Recombinant Brain Derived Neurotrophic Factor (BDNF)

GABARAP重組人 GABARAP / Apg8p1 蛋白 (His & MBP 標(biāo)簽) Protein

CDK4 Protein Human 重組人 CDK4 / CMM3 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

NA Protein H7N9 重組甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) 神經(jīng)酸酶 (Neuraminidase / NA) (高活性)

?無菌操作?：細(xì)胞培養(yǎng)需在無菌環(huán)境下進(jìn)行,，使用前需對超凈工作臺進(jìn)行紫外線照射滅菌,，定期清潔培養(yǎng)箱。實(shí)驗(yàn)人員需更換工作服,、鞋套,，戴口罩、手套,。

?器材滅菌?：玻璃器皿,、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌，塑料制品則多選擇環(huán)氧乙烷滅菌或購買已滅菌產(chǎn)品,。

?試劑選擇?：所用培養(yǎng)液,、血清、緩沖液等試劑應(yīng)無菌,、無污染,，使用前需進(jìn)行無菌檢測。不同細(xì)胞對培養(yǎng)液成分要求有差異,，應(yīng)按細(xì)胞類型選擇合適培養(yǎng)液,。

?培養(yǎng)條件?：多數(shù)哺乳動物細(xì)胞適宜培養(yǎng)溫度為37℃,，偏差應(yīng)控制在±0.5℃。培養(yǎng)箱應(yīng)保持良好密封性,，定期檢查氣體濃度與流量,，細(xì)胞培養(yǎng)通常需5%CO2以維持培養(yǎng)液pH值穩(wěn)定。培養(yǎng)箱內(nèi)濕度應(yīng)保持在95%左右,。

?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),、生長狀態(tài)與培養(yǎng)液顏色變化。

?定期檢測?：定期對細(xì)胞進(jìn)行支原體,、細(xì)菌,、真菌等污染檢測。