原理:
采用雙抗體夾心法測(cè)定人雄激素結(jié)合蛋白（ABP）水平,。用純化的人雄激素結(jié)合蛋白（ABP）抗體包被微孔板，制成固相載體,，實(shí)驗(yàn)時(shí)依次在微孔板中加入樣本及標(biāo)準(zhǔn)品,，并加入 HRP 標(biāo)記的 ABP 抗體，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，反復(fù)洗滌后加底物 TMB 顯色,。TMB 在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色,，再用硫酸終止反應(yīng)，轉(zhuǎn)變成黃色,。顏色的深淺和樣品中的 ABP含量呈正相關(guān),。采用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)測(cè)定吸光度（OD 值），根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),，計(jì)算測(cè)試樣品中 ABP 濃度,。 
實(shí)驗(yàn)材料與試劑配制：
1. 儀器與材料：酶標(biāo)儀（使用前預(yù)熱30分鐘），微量加液器,、吸頭,、蒸餾水或去離子水，濾紙,。
2. 緩沖液使用：加5ul 的緩沖液于50ul 的樣品中,，如果樣品量不夠或者不確定，緩沖液和樣品的混合比例不要小于1:10即可,。
混勻,，靜置1小時(shí)備用（如果標(biāo)本是血清或者血漿，此步驟忽略）,。
3. 洗液的配制：按1:100的比例配制洗液備用,。
樣品收集、處理及保存
1. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：適用于檢測(cè)體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份,。用無(wú)菌管收集細(xì)胞上清液,，以1000×g離心15分鐘，收集上清,。
2. 細(xì)胞：用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞3次,，調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到104
-106
/ml 左右，通過(guò)反復(fù)凍融,，使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,，或
者細(xì)胞超聲粉碎，離心取上清液檢測(cè),。
3. 血清：在室溫下,，血液自然凝固，以1000×g離心15分鐘,，取上清待測(cè),。
4. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置10-20 分鐘后,，以1000×g離心15分鐘,，收集上
清。
5. 體液：包括胸腹水,、腦脊液,，分泌物等,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集，以1000×g離心15分鐘,，收集上清,。
6. 組織標(biāo)本：切取組織標(biāo)本，稱(chēng)取重量0.5mg,，加入500ul 的PBS,，用手工或勻漿器，或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿,，以2000-3000
rmp離心20 分鐘,，收集上清進(jìn)行檢測(cè)。
7. 樣品中不能含有NaN3,，因NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性,。
8. 保存：如果樣品不能立即檢測(cè)，應(yīng)將其分裝,，-70 ℃保存,，避免反復(fù)冷凍。保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀,，應(yīng)再次離心,。血液標(biāo)本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒,，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
操作步驟：
1. 取出試劑盒,，室溫（20-25℃）放置 30 分鐘。
2. 分組：取出 96 孔板,，根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)，把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理,。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)
品組（6 個(gè)濃度）,、空白孔、待測(cè)樣品組,。
注：為減少實(shí)驗(yàn)誤差,，保證準(zhǔn)確性，建議設(shè)置復(fù)孔,。
3. 加樣：依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入 50ul 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中,；空白對(duì)照孔加入 50ul 的蒸餾水；其余微孔中加入 50ul
的待測(cè)樣本,。
4. 加酶標(biāo)溶液：標(biāo)準(zhǔn)品組,、待測(cè)樣本組各孔中加入 100ul 的酶標(biāo)溶液（空白對(duì)照孔除外）,。
5. 溫育：酶標(biāo)板用封板紙密封后，放入濕盒內(nèi)于 37℃恒溫孵育 1 小時(shí),。
6. 洗板：用稀釋后的洗滌液注滿(mǎn)每孔,，靜置 15-30s，充分清洗酶標(biāo)板 5 次,，用吸水紙*拍干,。
7. 顯色：各孔加入顯色劑 A 液 50ul 后，再加入顯色劑 B 液 50ul,。
8. 終止：25-37℃下避光反應(yīng) 10-15 分鐘,，加入 50ul 終止液。
9. 讀板：在 450nm 波長(zhǎng)讀取各孔的 OD 值,。
注：讀板時(shí)必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡,，讀板時(shí)間控制在終止反應(yīng)后的 30 分鐘內(nèi)，以免影響準(zhǔn)確性,。
注意事項(xiàng)：
1. 實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭,，避免交叉污染。
2. 加樣：加樣時(shí),，要控制加樣速度,，避免*孔與最后一孔間的時(shí)間間隔過(guò)大，否則將會(huì)導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時(shí)間,，從而影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性,。
3. 孵育：嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)上規(guī)定的孵育時(shí)間和溫度進(jìn)行。
4. 反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀(guān)察反應(yīng)孔的顏色變化,，如果顏色較深,，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。
5. 建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測(cè)樣品含量,，如樣品濃度過(guò)高,，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)?jì)算結(jié)果時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
6. 建議使用本試劑盒時(shí)先做預(yù)實(shí)驗(yàn)（即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),，試用幾個(gè)標(biāo)本）,，如果對(duì)本試劑盒有任何疑問(wèn)，可和所購(gòu)經(jīng)銷(xiāo)商溝通,，如果因運(yùn)輸過(guò)程導(dǎo)致試劑盒失效,，可要求調(diào)換，但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失,。
安全性
1． 避免人體直接接觸顯色劑A,、B和終止液。一旦接觸到這些液體,，請(qǐng)盡快用水沖洗,。
2． 實(shí)驗(yàn)中不要進(jìn)食,、抽煙或使用化妝品。
3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份,。
保存條件及有效期：
1.試劑盒保存：2-8℃
2.有效期：6個(gè)