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詳細介紹
冷凍保存細胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大,，造成細胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些,。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 小鼠結(jié)腸黏膜上皮細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1171 |
商品介紹：
名稱 小鼠結(jié)腸黏膜上皮細胞 2.組織來源：結(jié)腸組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 小鼠結(jié)腸黏膜上皮細胞分離自結(jié)腸組織,；結(jié)腸在右髂窩內(nèi)續(xù)于盲腸,，在第3骶椎平面連接直腸。結(jié)腸分升結(jié)腸,、橫結(jié)腸,、降結(jié)腸和乙狀結(jié)腸4部分，大部分固定于腹后壁,，結(jié)腸的排列酷似英文字母“M",，將小腸包圍在內(nèi)。結(jié)腸橫切面由內(nèi)到外依次為：黏膜（上皮層,、固有層,、黏膜肌層），黏膜下層（疏松結(jié)締組織）,，肌層（內(nèi)環(huán)形,、外縱行兩層平滑肌）,，外膜（纖維膜或漿膜）,。腸黏膜上皮細胞是機體內(nèi)外環(huán)境的重要屏障，持續(xù)暴露于大量抗原中,，也是機體面對病原微生物的第一道防線,。因此，腸黏膜上皮細胞除有吸收,、分泌和轉(zhuǎn)運等重要生理功能之外,，在黏膜先天性和獲得性免疫防御機制中也起著重要作用。腸黏膜上皮細胞作為首先接觸抗原的細胞,，在黏膜免疫反應(yīng)的起始階段發(fā)揮關(guān)鍵作用,，它決定黏膜免疫反應(yīng)的發(fā)生、性質(zhì)和強度,。探討正常結(jié)腸黏膜上皮細胞的分離、體外培養(yǎng)方法,，為研究腸黏膜上皮細胞以及與腸黏膜相關(guān)疾病建立合適的細胞模型,。 5.方法簡介： 實驗室分離的小鼠結(jié)腸黏膜上皮細胞采用先機械分離法、后膠原酶消化法并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的小鼠結(jié)腸黏膜上皮細胞經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） 培養(yǎng)基含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-M159 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)上皮細胞樣 傳代特性可傳1-2代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%,；CO2，5% |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄，易碎,，取放蓋玻片時動作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大,，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化,；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min,，棄去上清,，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5,、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二,、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,；
2、PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3,、PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細胞30min；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,；
5,、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
TNFA 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽
PPP2CA 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
IL6 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標簽
小鼠 IL2RB / CD122 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶HA標簽
小鼠 IL2RB / CD122 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
小鼠 ERBB2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
HHIP 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標簽
HHIP 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
PRKAA1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
HSPA8 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
小鼠結(jié)腸黏膜上皮細胞Candida sp.嗜環(huán)蛋白;親環(huán)素A檢測試劑盒
Candida sp.嗜酸性粒趨化蛋白檢測試劑盒
Saccharomyces cerevisiae嗜酸性粒陽離子蛋白檢測試劑盒
Saccharomyces cerevisiae受體TNFRSF結(jié)合激1檢測試劑盒
Rhodotorula minuta受體激檢測試劑盒
Pichia anomala受體相互作用蛋白1檢測試劑盒
Saccharomyces sp.瘦素檢測試劑盒
Saccharomyces sp.瘦素受體檢測試劑盒
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