名稱    小鼠骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞

2.組織來源：骨骼肌組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

小鼠骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞分離自四肢肌肉組織,；骨骼肌又稱橫紋肌,，肌肉中的一種，約占全身重量的40%,。骨骼肌纖維為長柱形的多核細(xì)胞,，肌膜的外面有基膜緊密貼附。屬于橫紋肌,，橫紋肌還包括心肌與內(nèi)臟橫紋肌,，其中骨骼肌主要分布于四肢。每塊肌肉都是具有一定形態(tài),、結(jié)構(gòu)和功能的器官,，有豐富的血管、淋巴分布,，在軀體神經(jīng)支配下收縮或舒張,，進(jìn)行隨意運(yùn)動(dòng)。肌肉可根據(jù)共形狀,、大小,、位置、起止點(diǎn),、纖維方向和作用等命名,。依形態(tài)命名的如斜方肌、菱形肌,、三角肌,、梨狀肌等。骨骼肌細(xì)胞呈纖維狀,，不分支,，有明顯橫紋,，核很多，且都位于細(xì)胞膜下方,。肌細(xì)胞內(nèi)有許多沿細(xì)胞長軸平行排列的細(xì)絲狀肌原纖維,。每一肌原纖維都有相間排列的明帶（Ⅰ帶）及暗帶（A帶）。明帶染色較淺,，而暗帶染色較深,。暗帶中間有一條較明亮的線稱H線。H線的中部有一M線,。明帶中間,，有一條較暗的線稱為Z線,。兩個(gè)Z線之間的區(qū)段,，叫做一個(gè)肌節(jié)。肌衛(wèi)星細(xì)胞指骨骼肌中除骨骼肌纖維（肌細(xì)胞）外的一種扁平,、有突起的細(xì)胞,。著于肌纖維（肌細(xì)胞）表面；當(dāng)肌纖維（肌細(xì)胞）受損后,，肌衛(wèi)星細(xì)胞可增殖分化,，參與肌纖維（肌細(xì)胞）的修復(fù)，因此具有干細(xì)胞性質(zhì),。

5.方法簡介：

實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合多次差速貼壁法制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測：

實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞經(jīng)Desmin免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基含FBS、馬血清,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號(hào)CM-M206

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣

傳代特性可傳1-3代左右

消化液0.25%胰蛋白酶

培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品特點(diǎn):

1,、 使用方便:不需昂貴設(shè)備,。

2、 可以處理各種細(xì)菌菌體,，包括新鮮菌液和冰凍菌體,。

3、 將蛋白提取的時(shí)間縮短至30分鐘-1小時(shí),。

4,、 采用溫和的中性裂解組分，保持蛋白活性,。

5,、 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定,。

6,、 紫外檢測蛋白濃度時(shí)，背景干擾低,。

7,、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化,。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑,；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,，包括絲氨酸蛋白酶,、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等,。

8,、 本試劑盒中不有EDTA，與金屬螯和層析等兼容,。

細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍,，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：

1.棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。

3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

一、凍存時(shí)的注意事項(xiàng)：

1. 在冷凍保存之前,，應(yīng)觀察細(xì)胞生長是否良好(log phase) 且存活率高,，凍存的細(xì)胞密度為80 – 90 ％最佳

2. 冷凍前檢測細(xì)胞是否保有其*性質(zhì)，例如是否有雜細(xì)胞或者支原體等,。

3. 使用的DMSO 應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí),，以5~10 ml 小體積分裝，4 度避光保存,，勿作多次解凍,。使用的甘油也應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí)，以高壓蒸汽

滅菌后避光保存,。在開啟后一年內(nèi)使用,，因長期儲(chǔ)存后對(duì)細(xì)胞會(huì)有毒性。

4. 冷凍保存的細(xì)胞濃度：

4-1. 正常的成纖維細(xì)胞: 1-3x 10^6 cells/ml

4-2 雜交瘤細(xì)胞: 1~3 x 10^6 cells/ml,，細(xì)胞濃度不要太高,，某些雜交瘤會(huì)因冷凍濃度太高而在解凍24 小時(shí)后。

4-3.貼壁腫瘤細(xì)胞: 1 x 10^6,，依細(xì)胞種類而異,。腺癌類的細(xì)胞解凍后須較高之濃度,，而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml。

4-4. 懸浮細(xì)胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴類細(xì)胞須至少5 x 10^6 cells/ml,。

5. 冷凍保護(hù)劑濃度為5 %或10 ％ DMSO,，若是不確定細(xì)胞之冷凍條件，在做冷凍保存之同時(shí),，亦應(yīng)作一個(gè)backup culture,，以防止冷凍失敗。

收到細(xì)胞后,，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作,。

1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒,，拆下封口膜,，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過夜,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。

2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

3. 細(xì)胞傳代

1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細(xì)胞一次,；

2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右,；倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化,；

3) 用吸管輕輕吹打混勻,，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,，放入37℃,，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4) 待細(xì)胞*貼壁后,，培養(yǎng)觀察,。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。