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詳細(xì)介紹
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄，易碎,，取放蓋玻片時動作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大,，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 牙周膜干細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1357 |
商品介紹：
名稱 牙周膜干細(xì)胞 2.組織來源：牙周膜組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡介： 人牙周膜干細(xì)胞分離自牙周膜組織；牙周膜（牙周韌帶,、牙周間隙）是由致密結(jié)締組織所構(gòu)成。多數(shù)纖維排列成束,，纖維的一端埋于牙骨質(zhì)內(nèi),，另一端則埋于牙槽窩骨壁里，使牙齒固位于牙槽窩內(nèi),；牙周膜內(nèi)有神經(jīng),、血管、淋巴和上皮細(xì)胞等,。成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分,，由胚胎時期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來。間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells,，MSCs）來源于胚胎時期的中胚層組織,，具有很強(qiáng)的自我復(fù)制和多向分化潛能，具有向脂肪細(xì)胞,、成骨細(xì)胞,、軟骨細(xì)胞及肌細(xì)胞等多種終末細(xì)胞定向分化的能力，運(yùn)用 MSCs來修復(fù)軟骨損傷具有很好的應(yīng)用前景,，目前已能夠從骨髓,、脂肪、滑膜,、骨骼,、肌肉等組織以及羊水、臍帶、臍帶血中分離和制備間充質(zhì)干細(xì)胞,。牙周膜干細(xì)胞參與了牙周組織的病變,、修復(fù)及再生過程。現(xiàn)在,，利用牙周膜干細(xì)胞建立體外模型,，已經(jīng)成為有關(guān)員研究牙周組織疾病的重要手段。 5.方法簡介： 實(shí)驗(yàn)室分離的人牙周膜干細(xì)胞采用膠原酶消化結(jié)合差速貼壁法制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質(zhì)量檢測： 實(shí)驗(yàn)室分離的人牙周膜干細(xì)胞經(jīng)CD44免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-H234 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣 傳代特性可傳3-5代左右 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%；CO2,，5% |
冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大,，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些,。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s,，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min，棄去上清,，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二,、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h,；
6,、用PBS沖洗3次，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
大鼠 Interleukin 25 / IL25 / IL17E 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 CD40 / TNFRSF5 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 VEGFR2 / Flk-1 / CD309 / KDR 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 Ephrin-B3 / EFNB3 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 VEGF-D / VEGFD / FIGF 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
狗 WAP5 / WFDC2 / HE4 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 IL12B / IL-12B 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
Serum amyloid P component / APCS / SAP 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
TNFRSF19 / TROY 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
牙周膜干細(xì)胞Alcanivorax dieselolei赤霉素19檢測試劑盒
Microbacterium oxydans赤霉素20檢測試劑盒
Marinobacter hydrocarbonoclasticus酮酸雙激檢測試劑盒
Marinobacter hydrocarbonoclasticus草酸氧化檢測試劑盒
Marinobacter hydrocarbonoclasticus酚轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白檢測試劑盒
Marinobacter hydrocarbonoclasticus二氫黃酮4-還原檢測試劑盒
Bacillus barbaricus脆裂病檢測試劑盒
Citricoccus alkalitolerans6-葡萄糖檢測試劑盒
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