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詳細介紹
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),，懸浮細胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄,，易碎,，取放蓋玻片時動作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大,，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 食管平滑肌細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0809 |
商品介紹：
名稱 食管平滑肌細胞 2.組織來源：食管組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 人食管平滑肌細胞分離自食管組織；食管可分為頸段,、胸段和腹段,，脊椎動物食管的頸段位于氣管背后和脊柱前端，胸段位于左,、右肺之間的縱膈內(nèi),，胸段通過膈孔與腹腔內(nèi)腹相連，腹段很短與胃相連,。哺乳動物的食管結(jié)構(gòu)上由內(nèi)向外分四層：黏膜層,、黏膜下層、肌層和外膜,。其中,，肌層上1/3段為骨骼肌，下1/3為平滑肌，中段為骨骼肌和平滑肌混合組成,。其中,，肌纖維的排列方式分為內(nèi)環(huán)形和外縱形兩層。食管的蠕動是由食管平滑肌收縮嚴格控制,，食管還有括約肌,，位于環(huán)狀軟骨水平的，稱為食管上括約??；位于食管下端，一部分在膈上,，穿過膈孔,，另一部分在膈下的高壓帶，稱為食管下括約肌,。食管平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后,，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一,，呈梭形,、不規(guī)則形、三角形或扇形,，核卵圓形,、居中；2周后細胞匯合,，多數(shù)細胞伸展呈長梭形,，胞漿豐富，有分枝狀突起,，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,，高低起伏；細胞密度低時,，常交織成網(wǎng)狀,；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀,。傳代后細胞生長較快,，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點,。 5.方法簡介： 實驗室分離的人食管平滑肌細胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的人食管平滑肌細胞經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌,、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-H032 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)成纖維細胞樣 傳代特性可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%,；CO2，5% |
冷凍保存細胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大小,；
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s,，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2,、PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,；
5,、PBS沖洗細胞3次，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
小鼠 ITGA2B 基因全長ORF克隆
小鼠 IL23R 基因全長ORF克隆
小鼠 IL15RA 基因全長ORF克隆
小鼠 IgG3-Fc 基因ORF克隆 (非全長)
小鼠 IgG2b-Fc 基因ORF克隆 (非全長)
小鼠 IgG2a-Fc 基因ORF克隆 (非全長)
小鼠 IL12B 基因全長ORF克隆
小鼠 IL12A 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長ORF克隆
小鼠 FAU 基因全長ORF克隆
小鼠 MT-CO2 基因全長ORF克隆
食管平滑肌細胞31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Interferon gamma
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Collagen alpha-1(XXVII) chain
78-5000 pg/mL 人ABO組織血型系統(tǒng)轉(zhuǎn)移(BGAT)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL 人鏈接斑珠蛋白(Junction plakoglobin)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Complement C1q subcomponent subunit A
0.312-20 ng/mL 人固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白2(SREBP-2)ELISA試劑盒
1.56-100 ng/mL ELISA Kit for Human Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 8
0.156-10 nmol/mL ELISA Kit for Human Myocardin
0.312-20 ug/mL 人巨噬唾液酸蛋白(Macrosialin)ELISA試劑盒
M-腸道菌瓊脂 英文名稱：M-Enterococcus Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g
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