實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),,而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),,懸浮細(xì)胞可使用滴片法,;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理,;
3.蓋玻片非常薄,,易碎,取放蓋玻片時(shí)動作要輕,;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率,;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
產(chǎn)品屬性:
商品介紹:
名稱 大鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞 2.組織來源:胎盤組織 3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡介: 大鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞分離自胎盤組織,;胎盤(placenta)是哺乳動物妊娠期間由胚胎的胚膜和母體子宮內(nèi)膜聯(lián)合長成的母子間交換物質(zhì)的過渡性器官,由羊膜,、葉狀絨毛膜和底蛻膜構(gòu)成,。胎兒在子宮中發(fā)育,依靠胎盤從母體取得營養(yǎng),,而雙方保持相當(dāng)?shù)莫?dú)立性,。胎盤還產(chǎn)生多種維持妊娠的激素,是一個重要的內(nèi)分泌器官,。有些爬行類和魚類也以胎生方式繁殖后代,,胚胎生長出一些輔助結(jié)構(gòu)如卵黃囊、鰓絲等與母體組織緊密結(jié)合,,以達(dá)到母子間物質(zhì)的交換,,這樣的結(jié)構(gòu)稱假胎盤。絨毛膜是由滋養(yǎng)層和胚外中胚層的壁層構(gòu)成,。胚泡植入子宮內(nèi)膜后,,在胚泡表面形成許多絨毛樣的突起,以細(xì)胞滋養(yǎng)層為中軸,,外裹合體滋養(yǎng)層,,稱初級干絨毛。胚外中胚層長入初級干絨毛的中軸,,使初級干絨毛變成了次級干絨毛,。當(dāng)絨毛膜的胚外中胚層內(nèi)形成血管網(wǎng)和結(jié)締組織,并與胚體內(nèi)的血管相通時(shí),,次級干絨毛改稱三級干絨毛,。三級干絨毛末端的細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞形成細(xì)胞滋養(yǎng)層殼。隨著胚胎發(fā)育,叢密絨毛膜與基蛻膜共同構(gòu)成了胎盤,,而平滑絨毛膜則和包蛻膜一起逐漸與壁蛻膜融合,。 5.方法簡介: 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞采用胰蛋白酶-DNA酶聯(lián)合消化法結(jié)合密度梯度離心法制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質(zhì)量檢測: 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞經(jīng)Cytokeratin-7免疫熒光鑒定,,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息: 包被條件PLL(0.1mg/ml) 培養(yǎng)基含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-R182 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)梭形,、多角形 傳代特性可傳1-2代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相:空氣,,95%;CO2,,5% |
冷凍保存細(xì)胞之方法,?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時(shí), 以防止冰晶過大,,造成細(xì)胞大量死亡,,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些,。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一,、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),,混懸10s,,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,;
3,、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,,置37℃消化10 min后,,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,,直至組織*被消化,;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,,1200r/min 離心10min,,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
5,、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),;
二、免疫熒光鑒定:
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,然后在4℃條件下,,用0.1%Triton X-100透膜15min,;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗,, 37℃條件下放置1h,;
6、用PBS沖洗3次,,每次10min,,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
食蟹猴 CD2 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 PD-L1 / B7-H1 / CD274 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 PD1 / PDCD1 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
狗 CD2 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 EphB2 / Hek5 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 CRELD2 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 IL1RL1 / ST2 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 C2 / Complement Component 2 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 CD320 / 8D6A 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞Bensingtonia yamatoana色素cyp3a11檢測試劑盒
Sporobolomyces ruber色素cyp2d11檢測試劑盒
Candida nitrativorans色素cyp2d12檢測試劑盒
Candida krissii色素cyp2c19檢測試劑盒
Trichosporon laibachii色素cyp3a11檢測試劑盒
Mrakia psychrophila屋塵螨特異性IgG抗體檢測試劑盒
Trichosporon laibachii屋塵螨變應(yīng)原Derp1 IgG抗體檢測試劑盒
Candida maltosaC-C趨化因子6檢測試劑盒