名稱    小鼠羊膜胚胎細胞

2.組織來源：胎盤組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介：

小鼠胚胎羊膜細胞分離自羊膜組織,；羊膜為單層上皮細胞互相連接構(gòu)成的薄膜。單層上皮細胞具有分泌羊水的作用,。隨著胚胎的生長發(fā)育,，羊膜與絨毛密切緊貼，形成胎膜,。胎膜隨著羊膜腔逐漸擴大而呈半透明的薄膜,，無血管，富有韌性（胎膜也就是羊膜腔的囊壁）,。羊膜腔內(nèi)充滿的液體為羊水,。羊膜僅覆蓋在胎盤的兒體面，并不深入胎盤組織中,，隨著妊娠的進展羊膜腔逐漸擴大,，占據(jù)整個子宮腔，羊膜是胎膜最內(nèi)一層,，是一層半透明的薄膜,，與覆蓋在胎盤、臍帶的羊膜層相連接,。羊膜是胎盤的最內(nèi)層,，與人眼結(jié)膜組織結(jié)構(gòu)相似，含有眼表上皮細胞,，包括結(jié)膜細胞和角膜上皮細胞生長所需要的物質(zhì)，其光滑,，無血管、神經(jīng)及淋巴,，具有一定的彈性,，厚0.02~0.5mm，在電鏡下,，其分為五層：上皮層,、基底膜、致密層,、纖維母細胞層和海綿層,，羊膜基底膜和羊膜基質(zhì)層含有大量不同的膠元,，主要為i,、iii,、iv、v,、vii型膠原和纖維粘連蛋白,、層粘連蛋白等成份,，正是這些成份使羊膜可以充當(dāng)“移植的基底膜"而發(fā)揮一種新的健康合適的基質(zhì),。羊膜細胞主要由羊膜上皮細胞和羊膜間充質(zhì)細胞組成,，均具有多分化潛能,，可轉(zhuǎn)化為神經(jīng)元，且還有合成,、釋放生物活性物質(zhì)和神經(jīng)營養(yǎng)因子的功能。

5.方法簡介：

實驗室分離的小鼠羊膜胚胎細胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測：

實驗室分離的小鼠羊膜胚胎細胞經(jīng)PCK免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號CM-M234

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細胞形態(tài)梭形,、多角形

傳代特性可傳1-2代

消化液0.25%胰蛋白酶

培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品特點:

1,、 使用方便:不需昂貴設(shè)備。

2,、 可以處理各種細菌菌體,，包括新鮮菌液和冰凍菌體。

3,、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時,。

4、 采用溫和的中性裂解組分,，保持蛋白活性,。

5、 含蛋白穩(wěn)定劑,，提取的蛋白穩(wěn)定,。

6、 紫外檢測蛋白濃度時,，背景干擾低,。

7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化,。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性,。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,，包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶,、天冬氨酸蛋白酶等,。

8、 本試劑盒中不有EDTA,，與金屬螯和層析等兼容,。

細胞處理：

1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1.棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

一,、凍存時的注意事項：

1. 在冷凍保存之前,，應(yīng)觀察細胞生長是否良好(log phase) 且存活率高，凍存的細胞密度為80 – 90 ％最佳

2. 冷凍前檢測細胞是否保有其*性質(zhì),，例如是否有雜細胞或者支原體等,。

3. 使用的DMSO 應(yīng)為試劑級等級，以5~10 ml 小體積分裝,，4 度避光保存,，勿作多次解凍。使用的甘油也應(yīng)為試劑級等級,，以高壓蒸汽

滅菌后避光保存,。在開啟后一年內(nèi)使用，因長期儲存后對細胞會有毒性,。

4. 冷凍保存的細胞濃度：

4-1. 正常的成纖維細胞: 1-3x 10^6 cells/ml

4-2 雜交瘤細胞: 1~3 x 10^6 cells/ml,，細胞濃度不要太高，某些雜交瘤會因冷凍濃度太高而在解凍24 小時后,。

4-3.貼壁腫瘤細胞: 1 x 10^6,，依細胞種類而異。腺癌類的細胞解凍后須較高之濃度，而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml,。

4-4. 懸浮細胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴類細胞須至少5 x 10^6 cells/ml,。

5. 冷凍保護劑濃度為5 %或10 ％ DMSO，若是不確定細胞之冷凍條件,，在做冷凍保存之同時,，亦應(yīng)作一個backup culture，以防止冷凍失敗,。

收到細胞后,，請按照以下方法進行操作。

1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,，75%酒精消毒,，拆下封口膜，放入37℃,，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜,，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng),。

3. 細胞傳代

1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次；

2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,，37℃溫浴3min左右,；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液,，再加入*培養(yǎng)液終止消化,；

3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M行接種傳代,，然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；

4) 待細胞*貼壁后,，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基,。