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詳細介紹
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎,，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率,；
5．如果細胞貼壁生長能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 小鼠肺大靜脈平滑肌細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0721 |
商品介紹：
名稱 小鼠肺大靜脈平滑肌細胞 2.組織來源：肺靜脈組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 小鼠肺大靜脈平滑肌細胞分離自肺大靜脈組織,；肺大靜脈在用肺呼吸的脊椎動物中,，把動脈血由肺送回心臟的靜脈，是一個靜脈里流動脈血的血管,。左右1對,，共4條，兩條連接右肺,，兩條連接左肺,。肺靜脈異位引流是指肺靜脈未能直接與左心房連接，而與右心房或體靜脈系統(tǒng)連接的先天性心血管異位,。肺靜脈淤血性肺動脈高壓,，是由于肺靜脈內血液淤滯而引起的肺動脈高壓。正常情況下,，肺循環(huán)具有血壓低,、阻力小和順應性大的特點,，肺動脈壓力高低取決于單位時間內肺動脈血流量和肺血管的阻力,，要維持肺循環(huán)的低壓、低阻的狀態(tài),，必須保證整個肺循環(huán)系統(tǒng)的暢通無阻,，血液順利地由肺動脈經(jīng)毛細血管進入肺靜脈,，再入左心室，經(jīng)過左心室收縮進入體循環(huán),，才能避免肺動脈內壓力升高,。肺大靜脈平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展,，細胞形態(tài)大小不一,，呈梭形、不規(guī)則形,、三角形或扇形,，核卵圓形、居中,；2周后細胞匯合,，多數(shù)細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富,，有分枝狀突起,，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏,；細胞密度低時,，常交織成網(wǎng)狀；密度高時,，則排列為旋渦狀或柵欄狀,。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合,，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點,。該細胞參與血管壁炎癥反應，保持靜脈管腔的通暢,，還是多數(shù)動脈疾病的靶細胞,。 5.方法簡介： 實驗室分離的小鼠肺大靜脈平滑肌細胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質量檢測： 實驗室分離的小鼠肺大靜脈平滑肌細胞經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS,、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-M009 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)成纖維細胞樣 傳代特性可傳3代左右 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%,；CO2,，5% |
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大,，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些,。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2,、PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,；
5,、PBS沖洗細胞3次，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h；
6,、用PBS沖洗3次,，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
IGFBP4 基因全長ORF克隆
ACO1 / IREB1 基因全長ORF克隆
NAT1 基因全長ORF克隆
AAMP 基因全長ORF克隆
ACTL6A 基因全長ORF克隆
ACTB 基因全長ORF克隆
ACTG2 基因全長ORF克隆
ACTC1 基因全長ORF克隆
ACPP 基因全長ORF克隆
ACO2 基因全長ORF克隆
小鼠肺大靜脈平滑肌細胞營養(yǎng)肉汁瓊脂 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：250g
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Glutathione S-transferase A3
1.56-100 U/L ELISA Kit for Human Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 28
0.625-40 ng/mL ELISA Kit for Human Epithelial cell adhesion molecule
0.78-50 ng/mL 人轉錄因子21(TCF-21)ELISA試劑盒
0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Caspase-9
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Importin subunit alpha-2
0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Intelectin-1
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human P2X purinoceptor 7
78-5000 pg/mL 人鞘氨醇1(SPP1)ELISA試劑盒
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