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詳細(xì)介紹
冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大,，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 小鼠棕色脂肪細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1311 |
商品介紹：
名稱 小鼠棕色脂肪細(xì)胞 2.組織來源：脂肪組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡介： 小鼠棕色脂肪細(xì)胞分離自棕色脂肪組織,；動物體內(nèi)存在棕色和白色兩種脂肪,，白色脂肪堆積在皮下，負(fù)責(zé)儲存多余熱量,；棕色脂肪負(fù)責(zé)分解引發(fā)肥胖的白色脂肪,，將后者轉(zhuǎn)化成二氧化碳、水和熱量,，本身不儲存熱量,。棕色脂肪組織呈棕色，其特點(diǎn)是組織中有豐富的毛細(xì)血管,，脂肪細(xì)胞內(nèi)散著許多小脂滴,，線粒體大而豐富，核圓形,，位于細(xì)胞中央,，這種脂肪細(xì)胞也稱為多泡脂肪細(xì)胞。棕色脂肪組織在成年動物極少,，新生兒及冬眠動物較多,，在新生兒主要分布在肩胛間區(qū)、腋窩及頸后部等處,。棕色脂肪組織僅在嬰兒時期發(fā)揮作用,，它們堆積在新生兒肩胛處，幫助維持體溫,。隨著年齡增長,，棕色脂肪會逐漸消失。最終,，動物體內(nèi)只殘存少量棕色脂肪細(xì)胞,，分布于頸部和鎖骨。脂肪細(xì)胞分為白色脂肪細(xì)胞和褐色（棕色）脂肪細(xì)胞,，常呈白色,，在嬰幼兒期大量增殖，到青春期數(shù)量達(dá)到,，此后數(shù)量一般不再增加,。細(xì)胞內(nèi)含有大量富含脂肪的小泡，稱為脂質(zhì)泡,，富含光面內(nèi)質(zhì)網(wǎng),。此外，還有一種褐色脂肪細(xì)胞,，在動物體內(nèi)主要存在于肩胛骨間,、頸背部,、腋窩、縱隔及腎臟周圍,，含有高度團(tuán)縮的褐色脂肪,，作用是將脂質(zhì)分解產(chǎn)熱，調(diào)節(jié)體內(nèi)脂質(zhì)比例,。 5.方法簡介： 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠棕色脂肪細(xì)胞采用膠原酶消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質(zhì)量檢測： 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠棕色脂肪細(xì)胞經(jīng)油紅O染色檢測,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-M213 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)梭形,、多角形 傳代特性屬于終末分化細(xì)胞,；屬于不增殖細(xì)胞群 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%,；CO2,，5% |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),，懸浮細(xì)胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄,，易碎，取放蓋玻片時動作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大,，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率,；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
實(shí)驗(yàn)報告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大小,；
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s,，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min，棄去上清,，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二,、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,；
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h,；
6,、用PBS沖洗3次，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
小鼠 TALLA-1 / TSPAN7 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
EDEM2 / C20orf31 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
TALLA-1 / TSPAN7 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
MMGT1 / EMC5 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
SEZ6L2 / PSK-1 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
DNASE1 / Deoxyribonuclease I / DNL1 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
TMED4 / ERS25 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
DCBLD2 / ESDN / CLCP1 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
DBH / Dopamine beta-Hydroxylase 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
BPIFB1 / LPLUNC1 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠棕色脂肪細(xì)胞鎘 AR,99.0%4-溴-2-三氟酚 99%Anti-IGF II/IGF2 胰島素樣生長因子-II抗體
鎘 SP4-芐氧基-3-氯苯酸 98%Anti-IMP3/IGF-IIBP3 胰島素樣生長因子2 mRNA 結(jié)合蛋白3抗體
鎘 99.98%，powder,粒徑:10±5μm5-基-2-氟苯酸 97%Anti-IGSF8/CD316 球蛋超家族成員8抗體
鎘 99.99%,granular4-羧基苯酸 97%Anti-IKK alpha KB抑制蛋白激α抗體
水質(zhì)鎘標(biāo)樣 0.1mg/l,，分析標(biāo)準(zhǔn)品 2-氯-4-氟苯酸 98%Anti-IKK beta KB抑制蛋白激β抗體
鎘 AR,powder,粒徑:10±5μm2-羧基苯酸 97%Anti-IKK gamma KB抑制蛋白激γ抗體
鎘 99.999%,granular2-氯-4-茴香酸 95%Anti-IKB beta 核因子κB抑制蛋白β抗體
2--6-甲基吡 98%5-氯-2-氟苯酸 97%Anti-phospho-IkB beta (Ser23) 化KB抑制蛋白β抗體
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