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詳細介紹
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃,，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄,，易碎,，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大,，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率,；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
產品屬性：
產品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 兔肺大靜脈內皮細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0863 |
商品介紹：
名稱 兔肺大靜脈內皮細胞 2.組織來源：肺靜脈組織 3.產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 兔肺大靜脈內皮細胞分離自肺大靜脈組織,；肺大靜脈在用肺呼吸的脊椎動物中，把動脈血由肺送回心臟的靜脈,，是一個靜脈里流動脈血的血管,。左右1對,，共4條，兩條連接右肺,，兩條連接左肺,。肺靜脈異位引流是指肺靜脈未能直接與左心房連接，而與右心房或體靜脈系統(tǒng)連接的先天性心血管異位,。肺靜脈淤血性肺動脈高壓,，是由于肺靜脈內血液淤滯而引起的肺動脈高壓。正常情況下,，肺循環(huán)具有血壓低,、阻力小和順應性大的特點，肺動脈壓力高低取決于單位時間內肺動脈血流量和肺血管的阻力,，要維持肺循環(huán)的低壓,、低阻的狀態(tài)，必須保證整個肺循環(huán)系統(tǒng)的暢通無阻,，血液順利地由肺動脈經毛細血管進入肺靜脈,，再入左心室，經過左心室收縮進入體循環(huán),，才能避免肺動脈內壓力升高,。細胞呈多邊形鵝卵石狀排列；該細胞在維持血管內外的動態(tài)平衡,、合成和分泌細胞因子和介質,、維持凝血和纖溶的動態(tài)平衡中起重要作用。 5.方法簡介： 實驗室分離的兔肺大靜脈內皮細胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法結合差速貼壁法,、并通過內皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測： 實驗室分離的兔肺大靜脈內皮細胞經CD31免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%） 培養(yǎng)基含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-Rb045 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)內皮細胞樣 傳代特性可傳1-3代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%,；CO2,，5% |
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大,，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些,。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2,、PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,；
5,、PBS沖洗細胞3次，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h；
6,、用PBS沖洗3次,，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
小鼠 CTNNB1 基因全長ORF克隆
小鼠 FGF9 基因全長ORF克隆
小鼠 GSK3B 基因全長ORF克隆
小鼠 TLR6 基因全長ORF克隆
小鼠 WNT3 基因全長ORF克隆
小鼠 CD8B 基因全長ORF克隆
小鼠 WNT-4 基因全長ORF克隆
小鼠 MAP2K4 基因全長ORF克隆
小鼠 SEMA4D 基因全長ORF克隆
小鼠 SDC1 基因全長ORF克隆
兔肺大靜脈內皮細胞胰蛋白胨大豆瓊脂顆粒 英文名稱：TSA Agar 產品規(guī)格：250g
0.312-20 ng/mL 人甘油酸激1(Phosphoglycerate kinase 1)ELISA試劑盒
改良愛德華瓊脂基礎 英文名稱：Edwards Medium,Modified 產品規(guī)格：250g
15.6-1000 pg/mL 人胰高血糖素(Glucagon)ELISA試劑盒
3%NaCl乳糖 英文名稱： 產品規(guī)格：20支
0.156-10 ng/mL 鉤端螺旋體(Lep)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
0.156-10 ng/mL 人雙重特異性促分裂原活化蛋白激激1(MAP kinase kinase 1)ELISA試劑盒
硝酸鹽肉湯（還原）（軍團菌） 英文名稱： 產品規(guī)格：20支/盒
0.78-50 ng/mL 豬瘟病毒(CSFV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
0.156-10 ng/mL 人甘露糖結合蛋白C(MBP-C)ELISA試劑盒
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