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上海谷研實(shí)業(yè)有限公司 |
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| 參考價(jià) | 面議 |
更新時(shí)間：2022-04-24 09:20:58瀏覽次數(shù)：229
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | GOY-01X1347 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 產(chǎn)品僅供科研使用 |
冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí),， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些,。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| 小鼠口腔粘膜成纖維細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1347 |
商品介紹：
名稱 小鼠口腔粘膜成纖維細(xì)胞 2.組織來(lái)源：口腔黏膜組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介： 小鼠口腔粘膜成纖維細(xì)胞分離自口腔粘膜組織；口腔（oral cavity）是消化道的起始部分,。前借口裂與外界相通,，后經(jīng)咽峽與咽相續(xù)?？谇粌?nèi)有牙,、舌等器官?？谇坏那氨跒榇?、側(cè)壁為頰、頂為腭,、口腔底為黏膜和肌等結(jié)構(gòu),。口腔借上,、下牙弓分為前外側(cè)部的口腔前庭（oral vestibule）和后內(nèi)側(cè)部的固有口腔（oral cavity proper）,；當(dāng)上、下頜牙咬合時(shí),，口腔前庭與固有口腔之間可借第三磨牙后方的間隙相通,。成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來(lái),。成纖維細(xì)胞較大,，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形,，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛,，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性,，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng)，在一定條件下,，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化,；成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用,。剛分離的表皮成纖維細(xì)胞呈圓形,、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中,。30min細(xì)胞貼壁,，其中部分開始伸出偽足,，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁*,，伸展成梭形,，胞核清晰，分布較均勻,，散在生長(zhǎng),，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長(zhǎng)迅速,，5-7天即呈融合狀態(tài),，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長(zhǎng),，平坦,、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明,，細(xì)胞核較大,，呈橢圓形，顏色淡,。細(xì)胞融合,，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。 5.方法簡(jiǎn)介： 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠口腔粘膜成纖維細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質(zhì)量檢測(cè)： 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠口腔粘膜成纖維細(xì)胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS,、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-M230 換液頻率每2-3天換液一次 生長(zhǎng)特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣 傳代特性可傳1-2代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%,；CO2，5% |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),，懸浮細(xì)胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄,，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕,；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大,，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率,；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1、無(wú)菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s,，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化,；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min,，棄去上清,，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二,、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,；
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜,；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
LMAN2L 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
DPEP2 / MBD-2 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
TMEM27 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
RANKL / OPGL / TNFSF11 / CD254 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
CRP / C-Reactive Protein 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
BMPR1B / ALK-6 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
食蟹猴 CD22 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
食蟹猴 / 恒河猴 CTLA4 / CD152 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
食蟹猴 CD14 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
食蟹猴 OLR1 / LOX1 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
小鼠口腔粘膜成纖維細(xì)胞3,3-二甲基烯酸 98%芬苯達(dá)唑 分析標(biāo)準(zhǔn)品Anti-Phospho-FRA1 (Ser265) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人,、大,、小鼠化FRA-1蛋白抗體IgG
4-(二乙) 99%芬苯達(dá)唑 98%Anti-FSCN1/FITC 熒光素標(biāo)記纖維束蛋白同源物1/肌動(dòng)蛋白集束蛋白/圓線蟲紫癜 抗體IgG
3-巴豆酸乙酯 99%托品酸 98%Anti-FSH/FITC 熒光素標(biāo)記促卵泡抗體IgG
3,3-二甲基烯酸甲酯 98%剛果紅 ARAnti-FSH-R/FITC 熒光素標(biāo)記促卵泡受體抗體IgG
克羅米通 97%剛果紅 ACSAnti-FSP/Spastin/FITC 熒光素標(biāo)記抗纖維母表面抗原抗體IgG
鹽酸坦索羅辛 98% 720 I.U./mgAnti-FST/FITC 熒光素標(biāo)記抗卵泡抑素抗體IgG
三丁基膦 95%泰洛星 效價(jià)potency: ≥800 units/mg tylosinAnti-F1 operon positive regulatory protein(NT)/FITC 熒光素標(biāo)記鼠疫耶爾森氏菌F1莢膜蛋白抗體（N端）IgG
3-(異酰氧)基氧基硅烷 97%磺異噁唑 分析標(biāo)準(zhǔn)品Anti-F1 operon positive regulatory protein(CT)/FITC 熒光素標(biāo)記鼠疫耶爾森氏菌F1莢膜蛋白抗體（C端）IgG
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