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詳細(xì)介紹
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí),， 以防止冰晶過大,，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些,。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| Hi-five (BTI-TN-5B1-4) (昆蟲細(xì)胞) | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0547 |
商品介紹：
名稱 Hi-five (BTI-TN-5B1-4) (昆蟲細(xì)胞) 生長(zhǎng)特性半貼半懸 細(xì)胞形態(tài)淋巴母細(xì)胞樣 背景描述Hi-five(BTI-TN-5B1-4)細(xì)胞是由武漢大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院胡遠(yuǎn)揚(yáng)教授提交保藏。Hi-five(BTI-TN-5B1-4)細(xì)胞是一株昆蟲細(xì)胞,，主要用于昆蟲病毒的擴(kuò)增,、病毒與宿主細(xì)胞相互作用的研究等。 生長(zhǎng)培養(yǎng)基TNM-FH＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:2-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，100%,； 溫度：28℃ |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),，懸浮細(xì)胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄,，易碎,，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率,；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1,、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大小,；
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s,，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min，棄去上清,，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h,；
6,、用PBS沖洗3次，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
IFNA1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
HGFR / c-MET 轉(zhuǎn)錄變體2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
TUBA1C 基因全長(zhǎng)ORF克隆
RUVBL1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
CSF1 轉(zhuǎn)錄變體4 基因全長(zhǎng)ORF克隆
UBAP2L 基因全長(zhǎng)ORF克隆
NFATC3 基因全長(zhǎng)ORF克隆
PHACTR3 基因全長(zhǎng)ORF克隆
BFSP2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
FBP2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
Hi-five (BTI-TN-5B1-4) (昆蟲細(xì)胞)吖啶黃素（3.0mg） Acridine Flavin 3.0mg/支*5
2 ug pEGFP-LC3 pEGFP-LC3 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
500mL Potassium Phosphate Solution,，0.2M, pH7.6 Potassium Phosphate Solution,，0.2M, pH7.6 常溫保存
10mL 鹽酸鹽溶液,100mg/mL Oxytetracycline HCl Solution -20 ℃避光保存
2 ug pQBI63 pQBI63 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
葡萄糖 20支
2 ug pCDF pCDF 低溫運(yùn)輸,，-20℃保存
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