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詳細(xì)介紹
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí),， 以防止冰晶過(guò)大,，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| 小鼠膀胱平滑肌細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0911 |
商品介紹：
名稱 小鼠膀胱平滑肌細(xì)胞 2.組織來(lái)源：膀胱組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介： 小鼠膀胱平滑肌細(xì)胞分離自膀胱組織,；膀胱是主要由平滑肌細(xì)胞組成的中空器官,，膀胱平滑肌的舒張和收縮使得膀胱分別儲(chǔ)存和排出尿液。膀胱平滑肌細(xì)胞表型的調(diào)控和可誘導(dǎo)一氧化氮合酶的表達(dá)與多種病理狀況有關(guān),，包括膀胱功能障礙,。研究表明，組織缺氧抑制膀胱平滑肌細(xì)胞的增殖,，膀胱平滑肌細(xì)胞的分化依賴于膀胱上皮細(xì)胞釋放的因子,。膀胱平滑肌細(xì)胞外基質(zhì)的分泌表型可通過(guò)細(xì)胞所經(jīng)歷的機(jī)械變形頻率而改變。平滑肌是許多疾病中的共同路徑,，因此,，了解在疾病發(fā)生及持續(xù)過(guò)程中平滑肌怎樣變化，這是治療方法取得進(jìn)展的重要一步,。膀胱壁由三層組織組成,，由內(nèi)而外為黏膜層、肌層和外膜,。其中,，肌層主要由平滑肌構(gòu)成。膀胱平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后,，可見(jiàn)細(xì)胞貼壁伸展,，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形,、不規(guī)則形,、三角形或扇形,，核卵圓形、居中,；2周后細(xì)胞匯合,，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形，胞漿豐富,，有分枝狀突起,，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng)，高低起伏,；細(xì)胞密度低時(shí),，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí),，則排列為旋渦狀或柵欄狀,。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快，4-6天即可匯合,，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn),。體外培養(yǎng)膀胱平滑肌細(xì)胞不僅為組織工程膀胱、尿道提供種植細(xì)胞的必要手段,，也是研究平滑肌瘤的基礎(chǔ)與前提,。 5.方法簡(jiǎn)介： 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠膀胱平滑肌細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質(zhì)量檢測(cè)： 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠膀胱平滑肌細(xì)胞經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS,、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-M059 換液頻率每2-3天換液一次 生長(zhǎng)特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣 傳代特性可傳3代左右 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%,；CO2，5% |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄,，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕,；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大,，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率,；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1、無(wú)菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s,，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5,、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二,、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4,、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
小鼠 FZD1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 IL15 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 IL7R 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 CTSZ / CTSX 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 IL13RA1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 IL2RG 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 CD64 / FCGR1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 COLEC12 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 CTSB 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 ASGR1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠膀胱平滑肌細(xì)胞0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human CDP-diacylglycerol--glycerol-3-phosphate 3-phosphatidyltransferase, mitochondrial
TBX培養(yǎng)基 英文名稱：TBX Agar 產(chǎn)品規(guī)格：1000(ML)
31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Suppressor of cytokine signaling 3
0.156-10 ng/mL 豬水泡性口炎病毒(VSV)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR法)
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Endoglin
0.312-20 ng/mL 人白介素13受體α-2（IL13RA2）ELISA試劑盒
78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Cytochrome P450 19A1
15.6-1000 pg/mL 腦膜炎奈瑟菌W135群(NM- W135)核酸檢測(cè)試劑盒
0.156-10 ng/mL 人谷草酰乙酸轉(zhuǎn)氨1樣蛋白1(GOT1L1)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL 病毒H7亞型(AIV-H7)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR法)
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