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詳細介紹
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大,，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些,。
產品屬性：
產品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 小鼠膀胱平滑肌細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0911 |
商品介紹：
名稱 小鼠膀胱平滑肌細胞 2.組織來源：膀胱組織 3.產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 小鼠膀胱平滑肌細胞分離自膀胱組織；膀胱是主要由平滑肌細胞組成的中空器官,，膀胱平滑肌的舒張和收縮使得膀胱分別儲存和排出尿液,。膀胱平滑肌細胞表型的調控和可誘導一氧化氮合酶的表達與多種病理狀況有關，包括膀胱功能障礙,。研究表明,，組織缺氧抑制膀胱平滑肌細胞的增殖，膀胱平滑肌細胞的分化依賴于膀胱上皮細胞釋放的因子,。膀胱平滑肌細胞外基質的分泌表型可通過細胞所經歷的機械變形頻率而改變,。平滑肌是許多疾病中的共同路徑，因此,，了解在疾病發(fā)生及持續(xù)過程中平滑肌怎樣變化,，這是治療方法取得進展的重要一步。膀胱壁由三層組織組成,，由內而外為黏膜層,、肌層和外膜。其中,，肌層主要由平滑肌構成,。膀胱平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展,，細胞形態(tài)大小不一,，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形,，核卵圓形,、居中；2周后細胞匯合,，多數(shù)細胞伸展呈長梭形,，胞漿豐富，有分枝狀突起,，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,，高低起伏；細胞密度低時,，常交織成網(wǎng)狀,；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀,。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合,，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點,。體外培養(yǎng)膀胱平滑肌細胞不僅為組織工程膀胱、尿道提供種植細胞的必要手段,，也是研究平滑肌瘤的基礎與前提,。 5.方法簡介： 實驗室分離的小鼠膀胱平滑肌細胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質量檢測： 實驗室分離的小鼠膀胱平滑肌細胞經α-SMA免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-M059 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)成纖維細胞樣 傳代特性可傳3代左右 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%,；CO2，5% |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃，并經過鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄,，易碎，取放蓋玻片時動作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大,，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率,；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
實驗報告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s,，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液,，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化,；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min,，棄去上清,，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二,、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,；
2,、PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3,、PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細胞30min；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5,、PBS沖洗細胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
小鼠 FZD1 基因全長ORF克隆
小鼠 IL15 基因全長ORF克隆
小鼠 IL7R 基因全長ORF克隆
小鼠 CTSZ / CTSX 基因全長ORF克隆
小鼠 IL13RA1 基因全長ORF克隆
小鼠 IL2RG 基因全長ORF克隆
小鼠 CD64 / FCGR1 基因全長ORF克隆
小鼠 COLEC12 基因全長ORF克隆
小鼠 CTSB 基因全長ORF克隆
小鼠 ASGR1 基因全長ORF克隆
小鼠膀胱平滑肌細胞0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human CDP-diacylglycerol--glycerol-3-phosphate 3-phosphatidyltransferase, mitochondrial
TBX培養(yǎng)基 英文名稱：TBX Agar 產品規(guī)格：1000(ML)
31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Suppressor of cytokine signaling 3
0.156-10 ng/mL 豬水泡性口炎病毒(VSV)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法)
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Endoglin
0.312-20 ng/mL 人白介素13受體α-2（IL13RA2）ELISA試劑盒
78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Cytochrome P450 19A1
15.6-1000 pg/mL 腦膜炎奈瑟菌W135群(NM- W135)核酸檢測試劑盒
0.156-10 ng/mL 人谷草酰乙酸轉氨1樣蛋白1(GOT1L1)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL 病毒H7亞型(AIV-H7)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法)
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