詳細(xì)介紹
冷凍保存細(xì)胞之方法,?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,,惟存活率稍微降低一些,。
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
CX-1(結(jié)腸癌細(xì)胞) | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0653 |
商品介紹:
名稱 CX-1(結(jié)腸癌細(xì)胞) 種屬人類 年齡(性別)44歲 組織來源未知 生長特性貼壁細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣 生長培養(yǎng)基DMEM+10% FBS+1% P/S 推薦傳代比例1:2-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時間~30小時 凍存條件 凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度:液氮 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%,;CO2,5% |
實(shí)驗要點(diǎn)及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),,而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法,;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理,;
3.蓋玻片非常薄,,易碎,,取放蓋玻片時動作要輕,;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,,但不宜過大,,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
實(shí)驗報告:
一,、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,,將成1mm3左右大??;
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),,混懸10s,置37℃條件下消化10min,,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,;
3,、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,,置37℃消化10 min后,,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化,;
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,,1200r/min 離心10min,,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,,放置于37℃ ,,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5,、差速貼壁1h后,,吸出培養(yǎng)基,,按實(shí)驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),;
二、免疫熒光鑒定:
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,;
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min,;
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,然后在室溫條件下,,用4% BSA封閉細(xì)胞30min,;
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗,, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
CRK 基因全長ORF克隆
SLC9A1 基因全長ORF克隆
LGALS7 基因全長ORF克隆
AGR2 基因全長ORF克隆
WFIKKN2 基因全長ORF克隆
RET Kinase 轉(zhuǎn)錄變體2 基因全長ORF克隆
CTPS2 基因全長ORF克隆
CTNNA2 基因全長ORF克隆
THBS2 基因全長ORF克隆
LOXL4 基因全長ORF克隆
CX-1(結(jié)腸癌細(xì)胞)LPM瓊脂添加劑 英文名稱:LPM Agar Additive 產(chǎn)品規(guī)格:1ml*5
0.312-20 ng/mL 人蛋白激Bα(PKBα)ELISA試劑盒
雙抗巧克力瓊脂 英文名稱:Double anti-chocolate agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g
標(biāo)準(zhǔn)I號營養(yǎng)瓊脂 英文名稱:Standard I Nutrient Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g
0.312-20 ng/mL 人性別決定區(qū)Y框蛋白2(SOX2)ELISA試劑盒
1/4MS培養(yǎng)基 英文名稱:1/4 MS Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g
1.56-100 ng/mL ELISA Kit for Human Phospholipase A2
胰酪胨大豆肉湯基礎(chǔ) 英文名稱:Trypticase-Soy-Polymyxin Broth Base 產(chǎn)品規(guī)格:250g
0.47-30 nmol/L 人過敏毒素/補(bǔ)體片斷4a(C4a/C4b/C4d)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL 人跨膜蛋白126A(Transmembrane protein 126A)ELISA試劑盒