實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),,而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),,懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃,,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,,易碎,取放蓋玻片時動作要輕,;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,,可以使用較大的培養(yǎng)皿,,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率,;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
產(chǎn)品屬性:
商品介紹:
名稱 RG2 [D74](大鼠膠質(zhì)瘤細胞) 別稱RG-2; Rat Glioma-2; D74; D74-RG2 種屬大鼠 年齡(性別)胚胎, 孕20天 組織來源腦部 生長特性貼壁細胞 細胞形態(tài)成纖維細胞樣 背景描述This cell line may be used for both in vitro and in vivo studies of a rat brain tumor. It grows well in cell culture and provides a simple, reproducible glioma model when inoculated into the brains of syngeneic rats.The RG2 and F98 (ATCC CRL-2397) gliomas can be used as rat brain tumor models in experimental neuro-oncology. 生物安全等級1 生長培養(yǎng)基DMEM+10%FBS+1%P/S 推薦傳代比例1:4-1:8 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液:55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度:液氮 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,,95%,;CO2,5% 溫度:37℃ |
冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,,造成細胞大量死亡,,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,,惟存活率稍微降低一些。
實驗報告:
一,、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,,然后用PBS將此組織塊清洗2次,,將成1mm3左右大小,;
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),,混懸10s,置37℃條件下消化10min,,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,,自然沉淀并收集上清,,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3,、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,,置37℃消化10 min后,,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,,直至組織*被消化,;
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,,棄去上清,,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
5,、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二,、免疫熒光鑒定:
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2,、PBS沖洗細胞2次,,每次10min,然后在4℃條件下,,用0.1%Triton X-100透膜15min,;
3、PBS沖洗細胞2次,,每次10min,然后在室溫條件下,,用4% BSA封閉細胞30min,;
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,;
5,、PBS沖洗細胞3次,,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗,, 37℃條件下放置1h,;
6、用PBS沖洗3次,,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
VSIG4 基因全長ORF克隆
CHI3L2 基因全長ORF克隆
TIMD4 基因全長ORF克隆
ACTA2 基因全長ORF克隆
TMEM183A 基因全長ORF克隆
SDC3 基因全長ORF克隆
SIRT6 基因全長ORF克隆
RASSF1 基因全長ORF克隆
ENO2 基因全長ORF克隆
SERPINB3 基因全長ORF克隆
RG2 [D74](大鼠膠質(zhì)瘤細胞)0.625-40 ng/mL ELISA Kit for Human Apelin
31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Neurofilament medium polypeptide
OXA添加劑 英文名稱:OXA Additive 產(chǎn)品規(guī)格:1ml/支*5
0.156-10 ng/ml ELISA Kit for Human Elongation factor G, mitochondrial
TSA表面接觸皿55mm 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:10個每包
6.25-400 nmol/L ELISA Kit for Pyridinoline
0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Gamma-synuclein
31.2-2000 pg/mL 人蛋白1調(diào)節(jié)亞基14B (PPP1R14B)ELISA試劑盒
78-5000 pg/mL 人表皮生長因子受體(EGFR)ELISA試劑盒
0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Probable D-lactate dehydrogenase, mitochondrial