實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),,而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),,懸浮細(xì)胞可使用滴片法,;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,,并經(jīng)過鉻酸洗液處理,;
3.蓋玻片非常薄,,易碎,,取放蓋玻片時動作要輕,;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,,但不宜過大,,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
小鼠嗅鞘細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1045 |
商品介紹:
名稱 小鼠嗅鞘細(xì)胞 2.組織來源:嗅球組織 3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡介: 小鼠嗅鞘細(xì)胞分離自嗅球組織;嗅鞘細(xì)胞(OECs)是在功能上介于施旺細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞之間的一種特殊的膠質(zhì)細(xì)胞,,具有神經(jīng)營養(yǎng),、抑制膠質(zhì)增生、瘢痕形成,、成鞘作用等,;為軸突生長提供了適宜的微環(huán)境及較強(qiáng)的遷移的特性,使其成為促進(jìn)中樞神經(jīng)再生的理想候選細(xì)胞之一,。嗅鞘細(xì)胞是目前所發(fā)現(xiàn)的極少數(shù)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)可以再生細(xì)胞之一,,其特點為終身具有神經(jīng)再生功能,還能夠釋放多種神經(jīng)營養(yǎng)因子,、神經(jīng)粘附分子,。被認(rèn)為是髓鞘化能力*的膠質(zhì)細(xì)胞,逐漸用于治療脊髓損傷,。嗅鞘細(xì)胞與膠質(zhì)細(xì)胞,、雪旺細(xì)胞在表現(xiàn)型上有共同點,它們都能促進(jìn)軸突的再生,,主要區(qū)別在于嗅鞘細(xì)胞不但存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng),,也存在于外周神經(jīng)中。嗅鞘細(xì)胞被認(rèn)為是一種可塑性很高的細(xì)胞,,它可表現(xiàn)出多種細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞表面標(biāo)志,,在嗅系統(tǒng)發(fā)育過程中,嗅鞘細(xì)胞根據(jù)其在組織定位的不同而有不同的抗原表型,其中P75NTR,、GFAP,、和O4可標(biāo)記大部分在體嗅鞘細(xì)胞,然而在嗅球外神經(jīng)層O4陽性嗅鞘細(xì)胞仍然可以在P75NTR陽性細(xì)胞層內(nèi)分化成E-NCAM陽性的細(xì)胞層,,還有一定比率的嗅鞘細(xì)胞P75NTR陰性而NY和S100表型為陽性,。嗅黏膜中的神經(jīng)元是生后才生長并在成年時繼續(xù)分化的神經(jīng)元,壽命為4-12周,,隨著新細(xì)胞的生長,,又建立了新的神經(jīng)支配關(guān)系。嗅鞘細(xì)胞存在于嗅神經(jīng)及嗅球的神經(jīng)層上,,沿嗅神經(jīng)的全長,,從周圍神經(jīng)系統(tǒng)到中樞神經(jīng)分布。 5.方法簡介: 實驗室分離的小鼠嗅鞘細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法,、結(jié)合差速貼壁法制備而來,,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測: 實驗室分離的小鼠嗅鞘細(xì)胞經(jīng)GFAP免疫熒光鑒定,,純度可達(dá)90%以上,,且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息: 包被條件PLL(0.1mg/ml) 培養(yǎng)基含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-M113 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)神經(jīng)元細(xì)胞樣 傳代特性屬于終末分化細(xì)胞,;屬于不增殖細(xì)胞群 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相:空氣,,95%;CO2,,5% |
冷凍保存細(xì)胞之方法,?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,,造成細(xì)胞大量死亡,,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗報告:
一,、分離與培養(yǎng):
1,、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,,然后用PBS將此組織塊清洗2次,,將成1mm3左右大小,;
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,,置37℃條件下消化10min,,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,,混懸10s,,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,,重復(fù)此步驟2-3次,,直至組織*被消化;
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,,1200r/min 離心10min,棄去上清,,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
5、差速貼壁1h后,,吸出培養(yǎng)基,,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二,、免疫熒光鑒定:
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,然后在4℃條件下,,用0.1%Triton X-100透膜15min,;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min,;
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,;
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗,, 37℃條件下放置1h;
6,、用PBS沖洗3次,,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
大鼠 CLEC1A 基因全長ORF克隆
大鼠 CLEC14A 基因全長ORF克隆
大鼠 CLEC10A 基因全長ORF克隆
大鼠 CD69 基因全長ORF克隆
大鼠 FCER2 基因全長ORF克隆
大鼠 CD93 基因全長ORF克隆
大鼠 EDA2R 基因全長ORF克隆
大鼠 IFNA5 基因全長ORF克隆
大鼠 IL13RA2 基因全長ORF克隆
大鼠 IL22RA2 基因全長ORF克隆
小鼠嗅鞘細(xì)胞0.78-50 ng/mL 人妊娠特異性β1糖蛋白11(PSBG-11)ELISA試劑盒
根瘤菌培養(yǎng)基 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:250g
15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Pro-interleukin-16
不*瓊脂培養(yǎng)基 英文名稱:Incomplete Agar Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g
1.56-100 ng/mL 人胰島素受體(ISR)ELISA試劑盒
78-5000 pg/mL 人轉(zhuǎn)錄因子Maf(Transcription factor Maf)ELISA試劑盒
0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human C-terminal propeptide of Collagen alpha-1(I) chain
78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Multidrug resistance-associated protein 9
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Sphingosine 1-phosphate receptor 3
乳糖-雙岐桿菌鑒定 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:20支