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詳細介紹
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 大鼠腦膜成纖維細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1385 |
商品介紹：
名稱 大鼠腦膜成纖維細胞 2.組織來源：腦膜組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 大鼠腦膜細胞分離自腦膜組織,；腦膜是顱骨與腦間的隔膜，一共有三層,，由外向內(nèi)為硬腦膜,、蛛網(wǎng)膜和軟腦膜。硬腦膜,，是一厚而堅韌的雙層膜,，外層是顱骨內(nèi)面的骨膜，僅疏松地附于顱蓋,，特別是在枕部與顳部附著更疏松,，稱為骨膜層,。蛛網(wǎng)膜是一層半透明的膜，位于硬腦膜深部,，其間有潛在性腔隙為硬腦膜下隙,。軟腦膜是緊貼于腦表面的一層透明薄膜，并伸入溝裂,。在腦室壁的某些部位,，軟腦膜及其血管與室管膜上皮共同形成脈絡組織。脈絡組織中的血管反復分支成叢,，突入腦室形成脈絡叢,。腦膜細胞圍繞著大腦，參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的正常發(fā)育,，能穩(wěn)定腦軟膜表面的細胞外基質,、組織放射狀膠質細胞網(wǎng)絡和小腦皮層分層結構。 5.方法簡介： 實驗室分離的大鼠腦膜成纖維細胞采用混合膠原酶消化法結合差速貼壁法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質量檢測： 實驗室分離的大鼠腦膜成纖維細胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-R301 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)成纖維細胞樣 傳代特性可傳3代左右；1-2代以內(nèi)狀態(tài)最佳 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%,；CO2，5% |
冷凍保存細胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些,。
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),，懸浮細胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄,，易碎，取放蓋玻片時動作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大,，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率,；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
實驗報告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s,，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液,，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化,；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清,，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二,、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,；
2,、PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3,、PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細胞30min,；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,；
5,、PBS沖洗細胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
小鼠 Art4 / CD297 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
CD20 / MS4A1 (aa 213-297) 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
/ 恒河猴 HER4 / ErbB4 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
/ 恒河猴 HER4 / ErbB4 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 FCGRT & B2M Heterodimer 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 Ninjurin-1 / NINJ1 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 TWSG1 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 CD40L / CD154 / TNFSF5 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
GDNF 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 B2M / Beta-2-microglobulin 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠腦膜成纖維細胞2,6-二酸 98%7-頭孢霉烷酸 98%Anti-CD133 Anti-gen/FITC 熒光素標記造血干抗原CD133抗體IgG
3-乙氧羰基苯酸 97%6-青霉烷酸 98%Anti-OX40/CD134/TNFRSF4/FITC 熒光素標記CD134抗體IgG
4-乙氧羰基苯酸 97%肉桂酸芐酯 98%Anti-IL-7Ra/CD127/PE 熒光素PE標記兔抗人、大,、小鼠,、馬、兔白介素-7受體a抗體IgG
3-乙氧基苯酸 98%反式2-溴肉桂酸 98%Anti-CD137/TNFRSF9/FITC 熒光素標記CD137抗體IgG
2-乙基苯酸 98%α-溴肉桂 98%Anti-CD133 antigen/PE 熒光素藻紅蛋白標記兔抗人,、大,、小鼠和果蠅CD133抗體IgG
3-乙氧羰基苯酸頻哪酯 97% 4-溴代苯乙烯, 包含100 - 500 ppm 4-叔丁基鄰苯二酚阻聚劑, 95%Anti-HVEM/TNFRSF14/FITC 熒光素標記腫瘤壞死因子受體超家族成員14抗體IgG
4-(乙基硫代)苯酸 98%3-溴-4-羥基苯甲 97%Anti-Syndecan-1/CD138/FITC 熒光素標記多配體聚糖抗體IgG
乙基酸 98%4-溴-2-氟肉桂酸 98%Anti-CD141/FITC 熒光素標記凝血調(diào)節(jié)蛋白抗體IgG
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