冷凍保存細(xì)胞之方法,?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,,造成細(xì)胞大量死亡,,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些,。

產(chǎn)品屬性:
商品介紹:
名稱 TPC-1 (甲狀腺癌細(xì)胞) 別稱TPC1 種屬人類 年齡(性別)女性,,成人 組織來源甲狀腺 生長特性貼壁細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣 生長培養(yǎng)基RPMI-1640+10% FBS+1%P/S 推薦傳代比例1:3-1:6 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度:液氮 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5% 溫度:37℃ |
實驗要點(diǎn)及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),,而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),,懸浮細(xì)胞可使用滴片法,;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,,易碎,,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,,可以使用較大的培養(yǎng)皿,,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率,;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一,、分離與培養(yǎng):
1,、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,,然后用PBS將此組織塊清洗2次,,將成1mm3左右大小,;
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,,置37℃條件下消化10min,,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,,混懸10s,,置37℃消化10 min后,,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化,;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,,1200r/min 離心10min,,棄去上清,,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,,放置于37℃ ,,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
5,、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),;
二、免疫熒光鑒定:
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,,棄去培養(yǎng)基,,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min,;
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min,;
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗,, 37℃條件下放置1h,;
6、用PBS沖洗3次,,每次10min,,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
KRT20 基因全長ORF克隆
KRT18 基因全長ORF克隆
KRT6A 基因全長ORF克隆
KRT5 基因全長ORF克隆
Thyroid peroxidase / TPO 基因全長ORF克隆
FCER1A 基因全長ORF克隆
SMR3B 基因全長ORF克隆
SCG2 基因全長ORF克隆
NGFR 基因全長ORF克隆
FHL2 基因全長ORF克隆
TPC-1 (甲狀腺癌細(xì)胞) 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Ornithine aminotransferase, mitochondrial
15.6-1000 pg/mL 人膜聯(lián)蛋白A1( Annexin A1)ELISA試劑盒
0.312-20 ng/mL 人轉(zhuǎn)銅蛋白1(Copper-transporting ATPase 1)ELISA試劑盒
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human DNA topoisomerase 2-alpha
31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Probable cation-transporting ATPase 13A2
緩沖蛋白胨水(BPW)顆粒 英文名稱:Buffered Peptone Water 產(chǎn)品規(guī)格:300ml/袋*10
沙氏葡萄糖肉湯(usp) 英文名稱:Sabouraud-dextrose Broth 產(chǎn)品規(guī)格:250g
0.625-40 ng/mL ELISA Kit for Human Insulin receptor substrate 2
0.312-20 ng/mL 人肽S-轉(zhuǎn)移A3(Glutathione S-transferase A3)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Diacylglycerol