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詳細(xì)介紹
冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存,。*-20 ℃不可超過1 小時(shí),， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| 兔肺大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0723 |
商品介紹：
名稱 兔肺大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 2.組織來源：肺動(dòng)脈組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡介： 兔肺大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞分離自肺大動(dòng)脈組織,；肺大動(dòng)脈亦稱肺動(dòng)脈干,。在呼吸空氣的脊椎動(dòng)物中，把靜脈血由心臟導(dǎo)向肺臟的動(dòng)脈,。肺大動(dòng)脈起于右心室,，在主動(dòng)脈之前向左上后方斜行，在主動(dòng)脈弓下方分為左,、右肺動(dòng)脈,，經(jīng)肺門入肺。肺動(dòng)脈干位于心包內(nèi),，為一粗短的動(dòng)脈干,。起自右心室，在升主動(dòng)脈前方向左后上方斜行,，至主動(dòng)脈弓下方分為左,、右肺動(dòng)脈。左肺動(dòng)脈較短,，在左主支氣管前方橫行,，分二支進(jìn)入左肺上、下葉。右肺動(dòng)脈較長而粗,，經(jīng)升主動(dòng)脈和上腔靜脈后方向右橫行,，至右肺門處分為三支進(jìn)入右肺上、中,、下葉,。肺大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞是肺血管的重要結(jié)構(gòu)細(xì)胞之一，在調(diào)控肺血管的收縮和舒張功能中有重要作用,。肺大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后,，可見細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一,，呈梭形,、不規(guī)則形、三角形或扇形,，核卵圓形,、居中；2周后細(xì)胞匯合,，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長梭形,，胞漿豐富，有分枝狀突起,，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏,；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀,；密度高時(shí),，則排列為旋渦狀或柵欄狀,。傳代后細(xì)胞生長較快,，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點(diǎn),。肺大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的異常是肺動(dòng)脈高壓發(fā)生發(fā)展的重要病理學(xué)特征,，其凋亡和增殖失衡是肺血管重塑的關(guān)鍵。研究表明,，急性和慢性缺氧均可導(dǎo)致肺動(dòng)脈高壓,，即缺氧性肺動(dòng)脈高壓,，推斷缺氧可能是通過促進(jìn)肺大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的增殖而參與缺氧性肺動(dòng)脈高壓的發(fā)生發(fā)展。肺大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞主要功能：①細(xì)胞表面表達(dá)介質(zhì)（ICAM-1和VCAM-1）參與血管壁炎癥反應(yīng)；②是多數(shù)重要?jiǎng)用}疾病的靶細(xì)胞,。肺大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞與主要病生理變化：①平滑肌增生易致肺動(dòng)脈高壓,；②先天性肺動(dòng)脈狹窄；③肺動(dòng)脈栓塞,。 5.方法簡介： 實(shí)驗(yàn)室分離的兔肺大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質(zhì)量檢測： 實(shí)驗(yàn)室分離的兔肺大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-Rb009 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣 傳代特性可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%,；CO2，5% |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄，易碎,，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大,，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率,；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s,，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化,；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min,，棄去上清,，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5,、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4,、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
NPY 基因全長ORF克隆
IL10Rb 基因全長ORF克隆
IL13Ra1 基因全長ORF克隆
C1QB 基因全長ORF克隆
GPX3 基因全長ORF克隆
S100A6 基因全長ORF克隆
GDF-9 基因全長ORF克隆
CLCF1 基因全長ORF克隆
GDF-15 基因全長ORF克隆
WBSCR22 基因全長ORF克隆
兔肺大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞0.156-10 ng/mL 人唾液酸結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集素10(Siglec-10)ELISA試劑盒
N6培養(yǎng)基 英文名稱：N6 Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g
7.5%氯化鈉肉湯 英文名稱：7.5% Sodium Chloride Broth 產(chǎn)品規(guī)格：250g
3%NaCl阿拉伯糖 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：20支
31.2-2000 pg/mL 豬流感病毒通用型(SIV-U) 核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Prolyl 4-hydroxylase subunit alpha-2
0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human B-cell lymphoma 3 protein
0.156-10 ng/mL 人腎損傷分子1(Kim-1)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human DNA (cytosine-5)-methyltransferase 1
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Oxysterols receptor LXR-alpha
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