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上海谷研實(shí)業(yè)有限公司 |
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| 參考價(jià) | 面議 |
更新時(shí)間：2022-04-24 09:26:09瀏覽次數(shù)：216
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | GOY-01X1351 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 產(chǎn)品僅供科研使用 |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄,，易碎,，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率,；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| 大鼠臍靜脈平滑肌細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1351 |
商品介紹：
名稱 大鼠臍靜脈平滑肌細(xì)胞 2.組織來源：臍帶組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡介： 大鼠臍靜脈平滑肌細(xì)胞分離自臍帶組織,；它是臍靜脈的重要結(jié)構(gòu)組成細(xì)胞之一,，在機(jī)體的正常生理過程中發(fā)揮著重要作用。臍帶是哺乳類的連接胎兒和胎盤的管狀結(jié)構(gòu),，臍帶中通過尿膜的血管即臍動(dòng)脈和臍靜脈,，卵黃囊的血管即臍腸系膜動(dòng)脈及臍腸系膜靜脈。在子宮中,，子宮動(dòng)脈在胎盤的母體部分出的毛細(xì)血管,，與胎盤的子體部胎兒毛細(xì)血管靠近，在此處母體和胎兒的血液間進(jìn)行CO2和O2,，代謝產(chǎn)物即代謝廢物和營養(yǎng)物質(zhì)的交換,。臍動(dòng)脈將胎兒產(chǎn)生的廢物運(yùn)送至胎盤，臍靜脈將O2和營養(yǎng)物質(zhì)從胎盤運(yùn)送給胎兒,。血管平滑肌是許多重大血管疾病的細(xì)胞基礎(chǔ),；血管平滑肌細(xì)胞的異常增加的生長潛力在血管疾病發(fā)生過程中起決定作用。由于臍帶是分娩過程中的廢棄物,，同時(shí)從臍帶中分離人臍靜脈平滑肌細(xì)胞方法相對(duì)成熟,，使得體外培養(yǎng)的臍靜脈平滑肌細(xì)胞作為研究血管的模型細(xì)胞。臍靜脈平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后,，可見細(xì)胞貼壁伸展,，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形,、不規(guī)則形,、三角形或扇形，核卵圓形,、居中,；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長梭形，胞漿豐富,，有分枝狀突起,，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏,；細(xì)胞密度低時(shí),，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí),，則排列為旋渦狀或柵欄狀,。傳代后細(xì)胞生長較快，4-6天即可匯合,，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點(diǎn),。 5.方法簡介： 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠臍靜脈平滑肌細(xì)胞采用膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質(zhì)量檢測： 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠臍靜脈平滑肌細(xì)胞經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-R231 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣 傳代特性可傳3代左右 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%,；CO2，5% |
冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存,。*-20 ℃不可超過1 小時(shí),， 以防止冰晶過大,，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些,。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大小,；
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s,，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min，棄去上清,，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二,、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,；
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h；
6,、用PBS沖洗3次,，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
大鼠 VE-Cadherin / CD144 / CDH5 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
大鼠 VE-Cadherin / CD144 / CDH5 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
大鼠 CLEC4A2 / DCIR 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
大鼠 TNFSF12 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
大鼠 CD40L / CD154 / TNFSF5 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
大鼠 ACVR1B / ALK-4 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
大鼠 VEGFR1 / FLT-1 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
小鼠 Transferrin / CD176 / Serotransferrin 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
小鼠 Transferrin / CD176 / Serotransferrin 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
小鼠 HGF / Hepatocyte Growth Factor 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
大鼠臍靜脈平滑肌細(xì)胞Anti-phospho-c-Jun (Thr93) /FITC 熒光素標(biāo)記化原癌基因c-Jun抗體IgG
Anti-phospho-c-Jun (Ser63) /FITC 熒光素標(biāo)記化原癌基因c-Jun抗體IgG
Anti-phospho-MEK1/MAPKK1(pSer298)/FITC 熒光素標(biāo)記抗化絲裂原活化蛋白激激1抗體IgG
Anti-phospho Histone H1,4(pSer27)/FITC 熒光素標(biāo)記抗化組蛋白H1,4樣蛋白抗體IgG
Anti-phospho c-kit/SCFR/CD117(pTyr936)FITC 熒光素標(biāo)記抗化原癌基因c-kit抗體IgG
Anti-Phospho-c-Kit (Tyr703) /FITC 熒光素標(biāo)記化原癌基因c-kit抗體IgG
Anti-Phospho-c-Kit (Tyr719) /FITC 熒光素標(biāo)記化原癌基因c-kit抗體IgG
Anti-Phospho-FAK (Tyr397) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人,、大、小鼠化粘著斑激抗體IgG
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