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詳細(xì)介紹
冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大,，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些,。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 小鼠腸神經(jīng)嵴干細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1317 |
商品介紹：
名稱 小鼠腸神經(jīng)嵴干細(xì)胞 2.組織來源：腸組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡介： 小鼠腸神經(jīng)嵴干細(xì)胞分離腸組織,；神經(jīng)嵴干細(xì)胞（neural crest stem cells，NCSC）,，即外周神經(jīng)系統(tǒng)干細(xì)胞,，起源于胚胎期的神經(jīng)管背側(cè)，與中樞神經(jīng)系統(tǒng)干細(xì)胞在形態(tài)學(xué)上有著顯著不同,，NCSC可表達(dá)低親和力神經(jīng)營養(yǎng)因子受體p75NTR而不能分化出少突膠質(zhì)細(xì)胞,，而中樞神經(jīng)系統(tǒng)干細(xì)胞與之恰好相反,。NCSC可在不同部位分化出多種組織，如神經(jīng)元,、神經(jīng)膠質(zhì),、黑色素細(xì)胞、內(nèi)分泌細(xì)胞,、平滑肌,、骨骼肌及骨等，其中可特異性分化出腸神經(jīng)系統(tǒng)中神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)的NCSC,，被稱為腸神經(jīng)嵴干細(xì)胞（gut neural crest stem cells,，GNCSC）。 5.方法簡介： 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠腸神經(jīng)嵴干細(xì)胞采用中性蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質(zhì)量檢測： 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠腸神經(jīng)嵴干細(xì)胞經(jīng)Nestin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含B-27 Supplement,、EGF、bFGF,、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-M216 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性懸浮 細(xì)胞形態(tài)球形 傳代特性可傳2-3代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%,；CO2,，5% |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),，懸浮細(xì)胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄,，易碎，取放蓋玻片時動作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率,；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s,，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化,；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min,，棄去上清,，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5,、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二,、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,；
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h,；
6,、用PBS沖洗3次，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
PLAC9 / Placenta-specific 9 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
PLBD2 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
GPHA2 / Glycoprotein hormone alpha 2 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 NKG2A / NKG2 / CD159A / KLRC1 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 ART4 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 IL2RA 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 CD160 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
狗 CD137 / 4-1BB / TNFRSF9 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
狗 IL13RA2 / IL13R 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
狗 CXCL16 / SR-PSOX 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠腸神經(jīng)嵴干細(xì)胞mRNA結(jié)合蛋白抗體Anti-Connexin-46(GJA3) Antibody對蝦桿狀病PCR檢測試劑盒多少錢
環(huán)指蛋白126抗體Anti-COPE Antibody副豬嗜血桿定量PCR檢測試劑盒規(guī)格
小鼠抗人紅單克隆抗體Anti-COX8A Antibody鉤端螺旋體PCR檢測試劑盒品牌
受體應(yīng)答蛋白2抗體Anti-COPS5 Antibody口蹄疫病O亞型PCR檢測試劑盒品牌
抗Rap1A抗體Anti-COPS5 Antibody(原貨號PB0521)馬鈴薯Cry3c基因PCR檢測試劑盒說明書
RAS癌基因相關(guān)蛋白RAB7抗體Anti-CPA1 Antibody大豆RRPCR檢測試劑盒說明書
c-Myc應(yīng)答蛋白抗體Anti-CP Antibody(原貨號PB0896)單增李斯特PCR檢測試劑盒多少錢
RAS癌基因相關(guān)蛋白RAB6B抗體Anti-CPAMD8 Antibody解脲支原體PCR檢測試劑盒多少錢
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