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詳細(xì)介紹
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 外周血來源內(nèi)皮祖細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1179 |
商品介紹：
名稱 外周血來源內(nèi)皮祖細(xì)胞 2.組織來源：外周血 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡介： 人外周血來源內(nèi)皮祖細(xì)胞分離自外周血,；外周血是除骨髓之外的血液,，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細(xì)胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細(xì)胞,，我們把這樣得到的干細(xì)胞稱為外周血干細(xì)胞,，在二十一世紀(jì)初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念。內(nèi)皮祖細(xì)胞是血管內(nèi)皮細(xì)胞的前體細(xì)胞,，亦稱為成血管細(xì)胞（Angioblast）,，是一群具有游走特性，能進(jìn)一步增殖分化的幼稚內(nèi)皮細(xì)胞,，缺乏成熟內(nèi)皮細(xì)胞的特征性表型，不能形成管腔樣結(jié)構(gòu),，其功能主要為參與了出生后缺血組織的血管發(fā)生和血管損傷后的修復(fù),。研究顯示,，內(nèi)皮祖細(xì)胞在心腦血管疾病、外周血管疾病,、腫瘤血管形成及創(chuàng)傷愈合等方面均發(fā)揮重要作用,，并為缺血性疾病的研究治療提供了新思路，EPCs生物學(xué)特性和治療作用的研究成為這一領(lǐng)域新的熱點,。 5.方法簡介： 實驗室分離的人外周血來源內(nèi)皮祖細(xì)胞采用采集外周血,、密度梯度離心、差速貼壁法結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的人外周血來源內(nèi)皮祖細(xì)胞經(jīng)CD34免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%） 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-H163 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)內(nèi)皮細(xì)胞樣 傳代特性可傳1-2代；不建議多次傳代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%,；CO2，5% |
冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄,，易碎，取放蓋玻片時動作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大,，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率,；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
實驗報告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s,，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化,；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min,，棄去上清,，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二,、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
小鼠 Smad1 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶HA標(biāo)簽
小鼠 MAPK14 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
小鼠 Smad5 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶HA標(biāo)簽
小鼠 CD54 / ICAM1 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
小鼠 VEGF-C 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶His標(biāo)簽
小鼠 ALK-2 / ACVR1 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶HA標(biāo)簽
GLP1R 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
Spp1 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽
MMP-12 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶Myc標(biāo)簽
小鼠 ACVR2A 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
外周血來源內(nèi)皮祖細(xì)胞四丁基氯化銨 離子色譜級, ≥99.0%2-啉 98%Anti-MYOG/Myogenin 肌紅蛋白抗體(肌生成素)
四丁基氯化銨 97%8-羥基喹啉 AR,99.0%Anti-Nephrin 去氧素抗體
四乙基氫氧化銨 AR,25%水溶液8-羥基喹啉-5-磺酸 水合物 98%Anti-nectin 2/CD112 黏附分子CD112抗體
四乙基氫氧化銨 AR,25%甲溶液8-羥基喹啉銅 94%Anti-Nestin 巢蛋白/神經(jīng)上皮干蛋白抗體
三鹽酸鹽 98%5-硝基-2-酚 98%Anti-Nestin 巢蛋白/神經(jīng)上皮干蛋白抗體（大,、小鼠）
四丁基氫氧化銨溶液 ～25% in H2O (～0.8 M)8-羥基喹啉半鹽 98%Anti-Neurobeachin 蛋白激錨定蛋白抗體
四丁基氫氧化銨溶液 10% in H2O1,，2-環(huán)己二 99%Anti-AKAP95 蛋白激A錨定蛋白95抗體
四丁基氫氧化銨溶液 ～25% in methanol (～0.8 M)4-溴苯乙 99%Anti-NeuN 神經(jīng)元核抗原抗體
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