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詳細(xì)介紹
冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí),， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| 大鼠腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1365 |
商品介紹：
名稱(chēng) 大鼠腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞 2.組織來(lái)源：腎上腺組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介： 大鼠腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞分離自腎上腺組織,；腎上腺是人體相當(dāng)重要的內(nèi)分泌器官,，由于位于兩側(cè)腎臟的上方，故名腎上腺,。腎上腺左右各一,，位于腎的上方，共同為腎筋膜和脂肪組織所包裹,。左腎上腺呈半月形,，右腎上腺為三角形。從側(cè)面觀察,，腺體分腎上腺皮質(zhì)和腎上腺髓質(zhì)兩部分,，周?chē)糠质瞧べ|(zhì)，內(nèi)部是髓質(zhì),。腎上腺內(nèi)部是髓質(zhì)部分,，分泌腎上腺素和去甲腎上腺素。這些激素在應(yīng)激狀態(tài)釋放增多,，能夠幫助升高血壓,，加快心率，升高血糖,，動(dòng)員全身的儲(chǔ)備物質(zhì),，為機(jī)體與外界環(huán)境的抗?fàn)幾骱贸浞譁?zhǔn)備。腎上腺外部是皮質(zhì)部分,，分泌醛固酮,、皮質(zhì)醇和少量的雌雄激素。醛固酮能夠促進(jìn)小便中尿鉀的排出和尿鈉的重吸收,，正常數(shù)量的醛固酮，對(duì)維持人體正常血壓有重要作用,。但是如果過(guò)多分泌,，會(huì)導(dǎo)致高血壓和低血鉀。皮質(zhì)醇是人體必需的激素之一。當(dāng)人體處于應(yīng)激狀態(tài)時(shí),，比如感冒,，發(fā)燒，遇到突發(fā)事件的時(shí)候,，腎上腺皮質(zhì)分泌大量的皮質(zhì)醇,，這些皮質(zhì)醇能夠動(dòng)員機(jī)體的存儲(chǔ)能源，為應(yīng)對(duì)內(nèi)部或者外部重要事件提供充分的物質(zhì)準(zhǔn)備,。當(dāng)皮質(zhì)醇缺乏時(shí),，機(jī)體在遇到重大事件的時(shí)候，往往缺乏足夠應(yīng)對(duì)能力,，容易被病毒或外界壓力所擊倒,。腎上腺產(chǎn)生的雄激素，對(duì)男性來(lái)講,，并,，但是對(duì)女性而言，是雄激素的一個(gè)重要來(lái)源,。 5.方法簡(jiǎn)介： 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞采用膠原酶消化法制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測(cè)： 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞經(jīng)3β-HSD免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） 培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-R236 換液頻率每2-3天換液一次 生長(zhǎng)特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)梭形、多角形 傳代特性可傳1-3代左右,；2代以?xún)?nèi)狀態(tài)最佳 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%；CO2,，5% |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄，易碎,，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕,；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過(guò)大,，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1,、無(wú)菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜,；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6,、用PBS沖洗3次，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
ORM2 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
Alpha-2-glycoprotein / AZGP1 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
MSLN / Mesothelin (aa 296-580) 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
大鼠 GGT1 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
大鼠 Ephrin-B3 / EFNB3 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
小鼠 TNFSF13 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
CANX / Calnexin 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
PIK3IP1 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
ILT6 / LILRA3 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
TMED1 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
大鼠腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞Candida kruseiγ-丁酸轉(zhuǎn)氨檢測(cè)試劑盒
Candida krusei補(bǔ)體因子D檢測(cè)試劑盒
Candida krusei化腺苷酸活化蛋白激檢測(cè)試劑盒
Candida guilliermondii二酸單酰輔A檢測(cè)試劑盒
Candida krusei腎素檢測(cè)試劑盒
Candida utilis周期素依賴(lài)性激抑制因子1A檢測(cè)試劑盒
Candida utilis色素P4503A4檢測(cè)試劑盒
Candida utilis補(bǔ)體片段檢測(cè)試劑盒
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