實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),,而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),,懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,,可以使用較大的培養(yǎng)皿,,但不宜過(guò)大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率,;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品屬性:
商品介紹:
名稱 大鼠腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞 2.組織來(lái)源:腎組織 3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介: 大鼠腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞分離自腎組織,;腎臟是機(jī)體的重要器官,,它的基本功能是生成尿液,借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物,、毒物,,同時(shí)經(jīng)重吸收功能保留水份及其他有用物質(zhì),如葡萄糖,、蛋白質(zhì),、氨基酸,、鈉離子、鉀離子,、碳酸氫鈉等,,以調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)平衡及維護(hù)酸堿平衡,。腎臟同時(shí)還有內(nèi)分泌功能,,生成腎素、促紅細(xì)胞生成素,、活性素D3,、前列腺素、激肽等,,又為機(jī)體部分內(nèi)分泌激素的降解場(chǎng)所和腎外激素的靶器官,。腎臟的這些功能,保證了機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定,,使新陳代謝得以正常進(jìn)行,。腎動(dòng)脈的分支為葉間動(dòng)脈,穿行于腎柱內(nèi),,上行至皮質(zhì)與髓質(zhì)交界處,,形成與腎表面平行的弓狀動(dòng)脈,。小葉間動(dòng)脈向被膜發(fā)出毛細(xì)血管,,并向周圍的腎小體發(fā)出入球小動(dòng)脈,進(jìn)入腎小囊后形成球形的毛細(xì)血管網(wǎng),,再匯集成出球小動(dòng)脈,,出腎小體。直小動(dòng)脈分支形成毛細(xì)血管網(wǎng),,再匯合成直小靜脈,,入弓狀靜脈、葉間靜脈,,最后匯合成腎靜脈經(jīng)腎門(mén)出腎,,注入下腔靜脈。腎動(dòng)脈既是腎的營(yíng)養(yǎng)血管,,又是腎的機(jī)能血管,,與腎泌尿機(jī)能密切相關(guān)。腎動(dòng)脈在腎實(shí)質(zhì)內(nèi)形成兩個(gè)毛細(xì)血管網(wǎng):腎小球毛細(xì)血管網(wǎng),,血壓較高,,利于血漿濾過(guò)形成原尿;球后毛細(xì)血管網(wǎng),,血壓較低,,利于腎小管的重吸,。腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞是腎動(dòng)脈的重要結(jié)構(gòu)細(xì)胞之一,在機(jī)體的正常生理過(guò)程中發(fā)揮著重要作用,。腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞主要功能有:①在血漿濾過(guò)形成原尿的過(guò)程中起重要作用,,②在腎小管的重吸收過(guò)程中起重要作用,③保持凝血和纖溶的動(dòng)態(tài)平衡,。 5.方法簡(jiǎn)介: 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法、并通過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái),,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質(zhì)量檢測(cè): 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)CD31免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,,且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息: 包被條件PLL(0.1mg/ml),,明膠(0.1%) 培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-R060 換液頻率每2-3天換液一次 生長(zhǎng)特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)內(nèi)皮細(xì)胞樣 傳代特性可傳2-3代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相:空氣,95%,;CO2,,5% |
冷凍保存細(xì)胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,, 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí),, 以防止冰晶過(guò)大,,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,,惟存活率稍微降低一些,。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1,、無(wú)菌條件下,,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,,將成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),,混懸10s,,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,,自然沉淀并收集上清,,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3,、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,,混懸10s,置37℃消化10 min后,,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化,;
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,,棄去上清,,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,,放置于37℃ ,,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5,、差速貼壁1h后,,吸出培養(yǎng)基,,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),;
二、免疫熒光鑒定:
1,、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,然后在4℃條件下,,用0.1%Triton X-100透膜15min,;
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后在室溫條件下,,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4,、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗,, 37℃條件下放置1h,;
6、用PBS沖洗3次,,每次10min,,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
小鼠 HPX 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 PILRA 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 Serpinb8 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 IFNAR1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 THY1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 OMD 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 TNFRSF10B / TRAILR2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 THSD1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 TIMP1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 ELANE / ELA2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
大鼠腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞0.312-20 ng/mL 人二甲基-二甲胺水解(DDAH2)ELISA試劑盒
0.39-25 ng/mL 前列腺素F2alpha (Prostaglandin F2alpha)ELISA試劑盒
含青接觸皿培養(yǎng)基平板(5.5cm) 英文名稱:Contact Plate Medium 產(chǎn)品規(guī)格:10個(gè)/包
31.2-2000 pg/mL 轉(zhuǎn)基因植物EPSPS基因核酸檢測(cè)試劑盒
15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Calcineurin-binding protein cabin-1
新生(125ug/支) 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:125ug/支*5
1.56-100 ng/mL ELISA Kit for Human Basigin
78-5000 pg/mL 人鞘氨醇1酯受體5(S1PR5)ELISA試劑盒
7.8-500 pg/mL 人polo樣蛋白激1(PLK1)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL 新型甲型H1N1流感病毒(IAV-H1N1)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?