化工儀器網(wǎng)
詳細介紹
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),，懸浮細胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄,，易碎,，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率,；
5．如果細胞貼壁生長能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 小鼠骨髓來源巨噬細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1121 |
商品介紹：
名稱 小鼠骨髓來源巨噬細胞 2.組織來源：骨髓 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 小鼠骨髓來源巨噬細胞分離自骨髓,；骨髓是機體的造血組織,，位于身體的許多骨骼內(nèi)。成年動物的骨髓分兩種：紅骨髓和黃骨髓,。紅骨髓能紅細胞,、血小板和各種白細胞。血小板有止血作用,，白細胞能殺滅與抑制各種病原體,，包括細菌、病毒等,；某些淋巴細胞能抗體,。因此，骨髓不但是造血器官,，它還是重要的免疫器官,。骨髓是存在于長骨(如肱骨,、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中，是一種海綿狀的組織,，能產(chǎn)生血細胞的骨髓略呈紅色,，稱為紅骨髓。出生時,，紅骨髓充滿全身骨髓腔,，隨著年齡增大，脂肪細胞增多,，相當部分紅骨髓被黃骨髓取代,，最后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。巨噬細胞屬免疫細胞,，有多種功能,，是研究細胞吞噬、細胞免疫和分子免疫學的重要對象,。巨噬細胞較易獲得,，便于培養(yǎng)，并可進行純化,。巨噬細胞屬不繁殖細胞群,，在條件適宜下可生活2-3周，多用做原代培養(yǎng),，難以長期生存,。巨噬細胞(Macrophages)是一種位于組織內(nèi)的白血球，源自單核細胞,，而單核細胞又來源于骨髓中的前體細胞,。巨噬細胞和單核細胞皆為吞噬細胞，在脊椎動物體內(nèi)參與非特異性防衛(wèi)(先天性免疫)和特異性防衛(wèi)(細胞免疫),。它們的主要功能是以固定細胞或游離細胞的形式對細胞殘片及病原體進行噬菌作用(即吞噬以及消化),，并激活淋巴球或其他免疫細胞，令其對病原體作出反應(yīng),。 5.方法簡介： 實驗室分離的小鼠骨髓來源巨噬細胞采用分離骨髓單個核細胞經(jīng)細胞因子誘導分化法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的小鼠骨髓來源巨噬細胞經(jīng)CD68免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-M141 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)巨噬細胞樣 傳代特性屬于終末分化細胞,；屬于不增殖細胞群 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%,；CO2,，5% |
冷凍保存細胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大小,；
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s,，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復此步驟2-3次,，直至組織*被消化；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2,、PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,；
5,、PBS沖洗細胞3次，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h；
6,、用PBS沖洗3次,，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
雪貂 TNFA / TNF-alpha 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標簽
雪貂 CD8a / CD8 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標簽
TGF-beta 1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
ApoE 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標簽
CHST11 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
APLNR 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
SHH / Sonic Hedgehog 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
CCNE1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶HA標簽
EXT1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
KDM1A / KDM1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
小鼠骨髓來源巨噬細胞0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human D-dopachrome decarboxylase
15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Adropin
0.156-10 ng/mL 人HMG盒蛋白1(HBP1)ELISA試劑盒
溶血瓊脂基礎(chǔ) 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：250g
0.156-10 ng/mL 人整合素α4(Integrin alpha-4)ELISA試劑盒
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human S-adenosylmethionine synthase isoform type-1
營養(yǎng)肉湯管(含棉簽) 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：10ml*20支/包
0.312-20 ng/mL 豬圓環(huán)病毒通用型(PCV-Ⅰ)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
氯化鎂孔雀綠肉湯（MM） 英文名稱：Rappaport-Vassiliadis Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g
31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Angiomotin-like protein 1
化工儀器網(wǎng)