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詳細介紹
冷凍保存細胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大,，造成細胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 膽管癌組織源細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1123 |
商品介紹：
名稱 膽管癌組織源細胞 2.組織來源：膽管癌組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 人膽管癌組織源細胞分離自癌組織,；癌（cancer）是指起源于上皮組織的惡性腫瘤,，是惡性腫瘤中最常見的一類。相對應的,，起源于間葉組織的惡性腫瘤統(tǒng)稱為肉瘤,。有少數(shù)惡性腫瘤不按上述原則命名,，如腎母細胞瘤、惡性畸胎瘤等,。一般人們所說的“癌癥"習慣上泛指所有惡性腫瘤,。癌癥具有細胞分化和增殖異常、生長失去控制,、浸潤性和轉移性等生物學特征,，其發(fā)生是一個多因子、多步驟的復雜過程,，分為致癌,、促癌、演進三個過程,，與吸煙,、感染、職業(yè)暴露,、環(huán)境污染,、不合理膳食、遺傳因素密切相關,。癌細胞,，是一種變異的細胞，是產(chǎn)生癌癥的病源,。癌細胞與正常細胞不同,，有無限增殖、可轉化和易轉移三大特點,，能夠無限增殖并破壞正常的細胞組織,。癌細胞除了分裂失控外（能進行多極分裂），還會局部侵入周圍正常組織甚至經(jīng)由體內(nèi)循環(huán)系統(tǒng)或淋巴系統(tǒng)轉移到身體其他部分,。分惡性和良性兩種,。 5.方法簡介： 實驗室分離的癌組織源細胞采用膠原酶消化、經(jīng)Percoll離心純化制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的人膽管癌組織源細胞經(jīng)檢測，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-H142 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)梭形,、多角形 傳代特性可傳5代左右,；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%,；CO2,，5% |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),，懸浮細胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄,，易碎，取放蓋玻片時動作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大,，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率,；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
實驗報告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化,；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min,，棄去上清,，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5,、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二,、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,；
2、PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3,、PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細胞30min；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5,、PBS沖洗細胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h,；
6,、用PBS沖洗3次，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
IL17A 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
大鼠 GM-CSF 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
小鼠 LIGHT / TNFSF14 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標簽
CD36 / SCARB3 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
BAFF / TNFSF13B 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
TGF-beta2 轉錄變體2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標簽
TNRC6A 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶HA標簽
PKC nu / PRKD3 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
小鼠 CLEC11A 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
小鼠 IL7 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
膽管癌組織源細胞0.312-20 ng/mL 人自噬蛋白1(BECN1)ELISA試劑盒
1.56-100 mIU/L 人胱天蛋白14(CASP14)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL 人11β羥基類固醇脫氫1型(HSD11b1) ELISA試劑盒
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Bone morphogenetic protein 3B
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Neuronal-specific septin-3
0.312-20 ng/mL 人Ras同系物家族成員C(Rho-related GTP-binding protein RhoC)ELISA試劑盒
15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Complement C5
15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Axin-2
31.2-2000 pg/mL 牛免疫缺陷病毒(BIV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
0.312-20 ng/mL 人FK506結合蛋白5(FKBP5)ELISA試劑盒
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