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詳細介紹
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),，懸浮細胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄,，易碎，取放蓋玻片時動作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率,；
5．如果細胞貼壁生長能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 骨髓單個核細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1369 |
商品介紹：
名稱 骨髓單個核細胞 2.組織來源：骨髓 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 人骨髓單個核細胞分離自骨髓；骨髓是機體的造血組織,，位于身體的許多骨骼內(nèi)。成年動物的骨髓分兩種：紅骨髓和黃骨髓,。紅骨髓能紅細胞、血小板和各種白細胞,。血小板有止血作用,，白細胞能殺滅與抑制各種病原體，包括細菌,、病毒等,；某些淋巴細胞能抗體。因此,，骨髓不但是造血器官，它還是重要的免疫器官,。骨髓是存在于長骨（如肱骨、股骨）的骨髓腔和扁平骨（如髂骨）的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中,，是一種海綿狀的組織,，能產(chǎn)生血細胞的骨髓略呈紅色，稱為紅骨髓,。出生時,，紅骨髓充滿全身骨髓腔，隨著年齡增大,，脂肪細胞增多，相當(dāng)部分紅骨髓被黃骨髓取代,，最后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓,。骨髓單個核細胞是骨髓中具有單個核的細胞,，包括淋巴細胞和單核細胞,。注意這里是（mononuclear cell）單個核細胞，而不是（Monocyte）單核細胞,。單個核細胞的體積,、形態(tài)和比重與骨髓其他細胞不同,，利用一定比例聚蔗糖和泛影酸鈉形成的等滲溶液作密度梯度離心，使一定密度的細胞按相應(yīng)密度梯度分布,，可將各種血細胞與單個核細胞分離。 5.方法簡介： 實驗室分離的人骨髓單個核細胞采用取骨髓,、通過密度梯度離心法制備而來制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的人骨髓單個核細胞經(jīng)檢測，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-H238 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性半貼壁半懸浮 細胞形態(tài)圓形 傳代特性不增殖；不傳代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%,；CO2，5% |
冷凍保存細胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大,，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些,。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s,，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液,，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化,；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二,、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,；
2、PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3,、PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,；
5、PBS沖洗細胞3次,，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
小鼠 CD3d / CD3 delta 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
IFN omega 1 / IFNW1 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
CD27 / TNFRSF7 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 LILRA5 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 HepaCAM2 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 TNFSF15 / TL1A 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 FLT3L / Flt3 ligand 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 BACE2 / Beta secretase 2 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 FcERI / FCER1A 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
SLITRK6 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
骨髓單個核細胞Saccharomyces cerevisiaeMutY同源物檢測試劑盒
Saccharomyces cerevisiae解整合素金屬蛋白8檢測試劑盒
Saccharomyces cerevisiae還原型輔Ⅰ檢測試劑盒
Saccharomyces cerevisiae磷脂酰肌檢測試劑盒
Candida parapsilosis蛋白S檢測試劑盒
Saccharomyces cerevisiae蛋白C檢測試劑盒
Saccharomyces cerevisiaeCXC趨化因子配體14檢測試劑盒
Saccharomyces cerevisiae巨噬集落激因子1受體檢測試劑盒
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