化工儀器網(wǎng)
詳細介紹
冷凍保存細胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大,，造成細胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些,。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 胎盤羊膜細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0877 |
商品介紹：
名稱 胎盤羊膜細胞 2.組織來源：胎盤組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 人胎盤羊膜細胞分離自胎盤組織,；胎盤（placenta）是哺乳動物妊娠期間由胚胎的胚膜和母體子宮內(nèi)膜聯(lián)合長成的母子間交換物質(zhì)的過渡性器官，由羊膜,、葉狀絨毛膜和底蛻膜構(gòu)成,。胎兒在子宮中發(fā)育，依靠胎盤從母體取得營養(yǎng),，而雙方保持相當?shù)莫毩⑿?。胎盤還產(chǎn)生多種維持妊娠的激素，是一個重要的內(nèi)分泌器官,。有些爬行類和魚類也以胎生方式繁殖后代,，胚胎生長出一些輔助結(jié)構(gòu)如卵黃囊、鰓絲等與母體組織緊密結(jié)合,，以達到母子間物質(zhì)的交換,，這樣的結(jié)構(gòu)稱假胎盤。羊膜是胎盤的最內(nèi)層,，與眼結(jié)膜組織結(jié)構(gòu)相似,，含有眼表上皮細胞，包括結(jié)膜細胞和角膜上皮細胞生長所需要的物質(zhì),，其光滑,，無血管、神經(jīng)及淋巴,，具有一定的彈性,；在電鏡下，其分為五層：上皮層、基底膜,、致密層,、纖維母細胞層和海綿層，羊膜基底膜和羊膜羊膜基質(zhì)層含有大量不同的膠元,，主要為Ⅰ,、Ⅲ、Ⅳ,、Ⅴ,、Ⅶ型膠原和纖維粘連蛋白、層粘連蛋白等成份,。羊膜細胞主要由羊膜上皮細胞和羊膜間充質(zhì)細胞組成,，均具有多分化潛能，可轉(zhuǎn)化為神經(jīng)元,，且還有合成,、釋放生物活性物質(zhì)和神經(jīng)營養(yǎng)因子的功能。 5.方法簡介： 實驗室分離的人胎盤羊膜細胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的人胎盤羊膜細胞經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件PLL（0.1mg/ml） 培養(yǎng)基含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-H050 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)梭形,、多角形 傳代特性可傳3代左右 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%,；CO2,，5% |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),，懸浮細胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄,，易碎,，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率,；
5．如果細胞貼壁生長能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大小,；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s,，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液,，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化,；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min,，棄去上清,，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5,、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二,、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,；
2,、PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3,、PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細胞30min,；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,；
5、PBS沖洗細胞3次,，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h,；
6,、用PBS沖洗3次，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
小鼠 AGER 基因全長ORF克隆
小鼠 RETN 基因全長ORF克隆
小鼠 SCF 基因全長ORF克隆
小鼠 CD209B 基因全長ORF克隆
小鼠 CLU 基因全長ORF克隆
小鼠 S100A4 基因全長ORF克隆
小鼠 SIRT5 基因全長ORF克隆
小鼠 EGF 基因全長ORF克隆
小鼠 LDLR 基因全長ORF克隆
小鼠 IL4I1 基因全長ORF克隆
胎盤羊膜細胞0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Low-density lipoprotein receptor-related protein 5
78-5000 pg/mL 蝦特定基因序列(FC)核酸檢測試劑盒
0.625-40 ng/mL 人Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)ELISA試劑盒
31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Apolipoprotein L1
0.156-10 ng/mL 人蛋硫氧化物還原B(MSRB)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL 人α血紅蛋白穩(wěn)定蛋白(AHSP)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL 人轉(zhuǎn)化生長因子β受體1(TGFR-1)ELISA試劑盒
31.2-2000 pg/mL 去(Noradrenaline) ELISA試劑盒
0.78-50 ng/mL 人卵泡抑素樣蛋白3(FSTL3)ELISA試劑盒
0.312-20 ng/mL 人真核翻譯起始因子2-α激3(EIF2AK3)ELISA試劑盒
化工儀器網(wǎng)