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詳細(xì)介紹
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),，懸浮細(xì)胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄,，易碎,，取放蓋玻片時動作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大,，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率,；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 大鼠前脂肪細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0993 |
商品介紹：
名稱 大鼠前脂肪細(xì)胞 2.組織來源：脂肪組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡介： 大鼠前脂肪細(xì)胞分離自脂肪組織；脂肪組織主要由大量群集的脂肪細(xì)胞構(gòu)成,，聚集成團(tuán)的脂肪細(xì)胞由薄層疏松結(jié)締組織分隔成小葉,；貯存的脂肪，在需要時可迅速分解成甘油和脂肪酸,，經(jīng)血液輸送到各組織以供利用,。它們影響胰島素敏感性、血壓水平,、內(nèi)皮功能,、纖溶活動及炎癥反應(yīng)，參與多種重要病理生理過程,；脂肪組織已由過去單純作為能量儲存的器官而成為一個極其重要的內(nèi)分泌系統(tǒng),。脂肪組織在體內(nèi)含有兩種主要的細(xì)胞：一種是在胞漿內(nèi)積聚脂滴的成熟脂肪細(xì)胞；另一種是雖未在胞漿內(nèi)積聚脂滴但有這種潛能的前脂肪細(xì)胞,。前脂肪細(xì)胞呈梭形,，有分裂和增殖的能力；成熟的脂肪細(xì)胞呈圓形,，已經(jīng)失去了分裂及增殖的能力,。由于前脂肪細(xì)胞是一類具有增殖和向脂肪細(xì)胞分化能力的特異化前體細(xì)胞，與肥胖有著非常密切的關(guān)系,。前脂肪細(xì)胞是一種類成纖維細(xì)胞,，在演變的過程中不斷吸收脂質(zhì)，最終成為成熟的脂肪細(xì)胞,。前脂肪細(xì)胞對外界機械損傷的抵抗力較強,，可望成為軟組織缺損的有益填充物。 5.方法簡介： 實驗室分離的大鼠前脂肪細(xì)胞采用膠原酶消化法制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的大鼠前脂肪細(xì)胞經(jīng)油紅O染色檢測，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-R090 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣 傳代特性可傳5代左右,；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%,；CO2，5% |
冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大,，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些,。
實驗報告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化,；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
大鼠 VEGFA 基因全長ORF克隆
大鼠 PRKD2 基因全長ORF克隆
狗 IGF1R 基因全長ORF克隆
狗 ACVR2A 基因全長ORF克隆
狗 XCL1 基因全長ORF克隆
狗 TNFRSF9 基因全長ORF克隆
狗 TNFRSF19 基因全長ORF克隆
狗 IL1R2 基因全長ORF克隆
狗 CD27 基因全長ORF克隆
狗 IL34 基因全長ORF克隆
大鼠前脂肪細(xì)胞0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Retinoic acid receptor responder protein 2
0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Estrogen-related receptor gamma
1.56-100 ng/mL 人細(xì)胞色素p450 2D6(CYP2D6)ELISA試劑盒
78-5000 pg/mL 人Nodal同源物(Nodal homolog)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL 人雙糖鏈蛋白多糖(Biglycan)ELISA試劑盒
1.25-80 ng/mL 人肌質(zhì)/內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣ATP3(SERCA3)ELISA試劑盒
Candida Elective瓊脂 英文名稱：Candida Elective Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Calcium/calmodulin-dependent 3', 5'-cyclic nucleotide phosphodiesterase 1C
0.625-40 ng/mL ELISA Kit for Human 85 kDa calcium-independent phospholipase A2
營養(yǎng)肉湯（日本標(biāo)準(zhǔn)） 英文名稱：Nutrient Broth（Japan） 產(chǎn)品規(guī)格：250g
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