化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。*-20 ℃不可超過1 小時(shí),， 以防止冰晶過大,，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些,。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| 小鼠脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1077 |
商品介紹：
名稱 小鼠脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞 2.組織來源：脈絡(luò)膜組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介： 小鼠脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自眼球脈絡(luò)膜組織；脈絡(luò)膜在視網(wǎng)膜和鞏膜之間,，含有豐富血管和色素細(xì)胞,，對(duì)外力沖擊的耐受性較視網(wǎng)膜差，當(dāng)眼球受到從前面來的外力的沖擊作用通過玻璃體傳到后極部時(shí),，堅(jiān)硬的鞏膜在其外面又有抵抗作用,，使脈絡(luò)膜在內(nèi)外兩種作用夾攻下而發(fā)生破裂和出血。脈絡(luò)膜呈暗褐色,，圍繞視神經(jīng)乳頭部有照膜,，為青綠色帶金屬光澤的三角形區(qū)。脈絡(luò)膜是眼球中膜的后2/3處的薄膜,，由纖維組織,、小血管和毛細(xì)血管組成，軟而薄,，棕紅色,，在鞏膜和視網(wǎng)膜之間，續(xù)連于睫狀體后方,。脈絡(luò)膜的血循環(huán)營(yíng)養(yǎng)視網(wǎng)膜外層,，其含有的豐富色素起遮光暗房作用,。主要功能是營(yíng)養(yǎng)視網(wǎng)膜外層及玻璃體，并有遮光作用,，使反射的物象清楚,。同時(shí)對(duì)視覺系統(tǒng)起保護(hù)作用，對(duì)整個(gè)視覺神經(jīng)有調(diào)節(jié)作用,。續(xù)連于睫狀體后方,，含豐富的血管和色素細(xì)胞，有營(yíng)養(yǎng)和遮光作用,。 5.方法簡(jiǎn)介： 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞采用膠原酶-中性蛋白酶混合消化法并通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測(cè)： 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)CD31免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%） 培養(yǎng)基含FBS,、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-M124 換液頻率每2-3天換液一次 生長(zhǎng)特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)內(nèi)皮細(xì)胞樣 傳代特性可傳2-3代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%；CO2,，5% |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄,，易碎,，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率,；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4,、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
IL1R9 / IL1RAPL2 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
IL18RAP / IL1R7 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
DCN / Decorin 轉(zhuǎn)錄變體A1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
tPAβ DNA 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
DAN / NBL1 轉(zhuǎn)錄變體2 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
S100A4 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
S100B 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
CCL22 / MDC 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
CNDP2 / CPGL 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
APOA1 / ApoAI 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
小鼠脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞78-5000 pg/mL 單增李斯特菌(LM)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法)
大豆蛋白胨 英文名稱：Peptone from Soybean Meal 產(chǎn)品規(guī)格：250g
62.5-4000 pg/mL ELISA Kit for Human Galectin-3
1.56-100 ng/mL ELISA Kit for Human Hemoglobin subunit beta
0.312-20 ng/mL 人磷脂?；嫉鞍拙厶?(Glypican-4)ELISA試劑盒
31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Superoxide dismutase [Mn], mitochondrial
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Testosterone
TTC 英文名稱：TTC 產(chǎn)品規(guī)格：10g
78-5000 pg/mL 人肌動(dòng)蛋白抑制蛋白1(PFN1)ELISA試劑盒
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Rho-related GTP-binding protein RhoC
化工儀器網(wǎng)