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詳細介紹
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大,，造成細胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些,。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 大鼠肺大靜脈內(nèi)皮細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0741 |
商品介紹：
名稱 大鼠肺大靜脈內(nèi)皮細胞 2.組織來源：肺靜脈組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 大鼠肺大靜脈內(nèi)皮細胞分離自肺大靜脈組織,；肺大靜脈在用肺呼吸的脊椎動物中，把動脈血由肺送回心臟的靜脈,，是一個靜脈里流動脈血的血管,。左右1對，共4條,，兩條連接右肺,，兩條連接左肺。肺靜脈異位引流是指肺靜脈未能直接與左心房連接,，而與右心房或體靜脈系統(tǒng)連接的先天性心血管異位,。肺靜脈淤血性肺動脈高壓，是由于肺靜脈內(nèi)血液淤滯而引起的肺動脈高壓,。正常情況下,，肺循環(huán)具有血壓低、阻力小和順應性大的特點,，肺動脈壓力高低取決于單位時間內(nèi)肺動脈血流量和肺血管的阻力,，要維持肺循環(huán)的低壓、低阻的狀態(tài),，必須保證整個肺循環(huán)系統(tǒng)的暢通無阻,，血液順利地由肺動脈經(jīng)毛細血管進入肺靜脈，再入左心室,，經(jīng)過左心室收縮進入體循環(huán),，才能避免肺動脈內(nèi)壓力升高。細胞呈多邊形鵝卵石狀排列,；該細胞在維持血管內(nèi)外的動態(tài)平衡,、合成和分泌細胞因子和介質(zhì)、維持凝血和纖溶的動態(tài)平衡中起重要作用,。 5.方法簡介： 實驗室分離的大鼠肺大靜脈內(nèi)皮細胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法,、并通過內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的大鼠肺大靜脈內(nèi)皮細胞經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%） 培養(yǎng)基含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-R013 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)內(nèi)皮細胞樣 傳代特性可傳2-3代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%；CO2,，5% |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄,，易碎,，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率,；
5．如果細胞貼壁生長能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大小,；
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s,，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2,、PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5,、PBS沖洗細胞3次,，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h；
6,、用PBS沖洗3次,，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
BRK 基因全長ORF克隆
PDPK1 基因全長ORF克隆
MAP2K2 基因全長ORF克隆
EREG 基因全長ORF克隆
PLK1 基因全長ORF克隆
WNT-4 基因全長ORF克隆
XCL1 基因全長ORF克隆
WNT-2 基因全長ORF克隆
STK11 / LKB1 基因全長ORF克隆
AURKA 基因全長ORF克隆
大鼠肺大靜脈內(nèi)皮細胞78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Fibroblast growth factor 5
0.156-10 ng/mL 人/蘇蛋白激LMTK3(Serine/threonine-protein kinase LMTK3)ELISA試劑盒
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Myelin basic protein
0.156-10 ng/mL 人鈣/鈣調(diào)蛋白依賴性3’,5’環(huán)核苷酸二酯1C(Cam-PDE 1C)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL 人肌動蛋白束蛋白(FSCN)ELISA試劑盒
葡萄糖酪胨瓊脂 英文名稱：Dextrose Casein-peptone Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g
31.2-2000 pg/mL 人干擾素α可誘導蛋白6(IFI6)ELISA試劑盒
15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Collagen type IV alpha-3-binding protein
含225ml胰酪胨大豆肉湯均質(zhì)袋 英文名稱：Trypticase Soy Polymyxin Broth 產(chǎn)品規(guī)格：10個/包
93.75-6000 pg/mL 人基質(zhì)金屬蛋白8/中性粒細胞膠原(MMP-8)ELISA試劑盒
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