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詳細(xì)介紹
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大,，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些,。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 小鼠成骨細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0995 |
商品介紹：
名稱 小鼠成骨細(xì)胞 2.組織來源：顱骨組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡介： 小鼠成骨細(xì)胞分離自顱骨組織；顱骨位于脊柱上方,，由23塊形狀和大小不同的扁骨和不規(guī)則骨組成,。除下頜骨及舌骨外，其余各骨彼此借縫或軟骨牢固連結(jié),，起著保護和支持腦,、感覺器官以及消化器和呼吸器的起始部分的作用。顱分腦顱和面顱兩部分,。腦顱位于顱的后上部,，內(nèi)有顱腔，容納腦,，共8塊,。面顱為顱的前下部分，包含眶,、鼻腔,、口腔等結(jié)構(gòu),，構(gòu)成面部的支架，共15塊,。成骨細(xì)胞是骨形成的主要功能細(xì)胞,，負(fù)責(zé)骨基質(zhì)的合成、分泌和礦化,。骨不斷地進行著重建,，骨重建過程包括破骨細(xì)胞貼附在舊骨區(qū)域，分泌酸性物質(zhì)溶解礦物質(zhì),，分泌蛋白酶消化骨基質(zhì),，形成骨吸收陷窩；其后,，成骨細(xì)胞移行至被吸收部位,，分泌骨基質(zhì)，骨基質(zhì)礦化而形成新骨,；破骨與成骨過程的平衡是維持正常骨量的關(guān)鍵,。成骨細(xì)胞培養(yǎng)不僅有助于了解骨形成機制、骨骼系統(tǒng)疾病的分子和細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ),，也是藥物篩選,、生物材料開發(fā)和生物工程研究的重要手段。 5.方法簡介： 實驗室分離的小鼠成骨細(xì)胞采用先用胰蛋白酶短時間消化,、后用膠原酶反復(fù)消化制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的小鼠成骨細(xì)胞經(jīng)ALP染色檢測,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-M091 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)梭形、多角形 傳代特性可傳3代左右 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%,；CO2，5% |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄，易碎,，取放蓋玻片時動作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大,，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5,、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二,、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
狗 IL20RA 基因全長ORF克隆
狗 IL13RA2 基因全長ORF克隆
狗 IL11RA 基因全長ORF克隆
狗 IL3RA 基因全長ORF克隆
狗 TGFB3 基因全長ORF克隆
狗 BMP5 基因全長ORF克隆
狗 BMP4 基因全長ORF克隆
狗 EFNB2 基因全長ORF克隆
狗 EFNA5 基因全長ORF克隆
狗 CX3CL1 基因全長ORF克隆
小鼠成骨細(xì)胞15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Fatty acid desaturase 2
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Endoplasmin
Kovcas氏靛基質(zhì)試劑盒 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：5ml*2
0.156-10 ng/mL 人3-羥基-3-甲基戊二酰合1(HMGCS1)ELISA試劑盒
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Hepcidin prohormone
31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Interleukin-23 subunit alpha
78-5000 pg/mL ELISA Kit for Mouse Serum amyloid A-3 protein
78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human ADP-ribosyl cyclase 2
0.625-40 ng/mL ELISA Kit for Human Myoferlin
血平皿（9cm） 英文名稱：Blood Agar Plates 產(chǎn)品規(guī)格：無
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