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上海谷研實業(yè)有限公司 |
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| 參考價 | 面議 |
更新時間：2022-04-12 10:26:13瀏覽次數(shù)：279
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | GOY-01X0689 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 產(chǎn)品僅供科研使用 |
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大,，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些,。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 兔視網(wǎng)膜色素上皮細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0689 |
商品介紹：
名稱 兔視網(wǎng)膜色素上皮細胞 2.組織來源：視網(wǎng)膜組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 兔視網(wǎng)膜色素上皮細胞分離自視網(wǎng)膜組織；視網(wǎng)膜居于眼球壁的內(nèi)層,，是一層透明的薄膜,。視網(wǎng)膜由色素上皮層和視網(wǎng)膜感覺層組成，兩層間在病理情況下可分開,，稱為視網(wǎng)膜脫離,。色素上皮層與脈絡(luò)膜緊密相連，由色素上皮細胞組成,，它們具有支持和營養(yǎng)光感受器細胞,、遮光、散熱以及再生和修復(fù)等作用,。組織學(xué)上視網(wǎng)膜分為10層,，由外向內(nèi)分別為：色素上皮層、視錐,、視桿細胞層,、外界膜、外顆粒層,、外叢狀層,、內(nèi)顆粒層、內(nèi)叢狀層,、神經(jīng)節(jié)細胞層,、神經(jīng)纖維層、內(nèi)界膜,。視網(wǎng)膜內(nèi)層為襯于血管膜內(nèi)面的一層薄膜,，有感光作用；后部鼻側(cè)有一視神經(jīng)乳頭,。視網(wǎng)膜上的感覺層是由三個神經(jīng)元組成,。第一神經(jīng)元是視細胞層，專司感光,，它包括錐細胞和桿細胞,。視桿細胞主要在離中心凹較遠的視網(wǎng)膜上,，而視錐細胞則在中心凹處最多。第二層叫雙節(jié)細胞,，約有10到數(shù)百個視細胞通過雙節(jié)細胞與一個神經(jīng)節(jié)細胞相聯(lián)系,，負責聯(lián)絡(luò)作用。第三層叫節(jié)細胞層,，專管傳導(dǎo),。視網(wǎng)膜是一層菲薄的但又非常復(fù)雜的結(jié)構(gòu)，它貼于眼球的后壁部,，傳遞來自視網(wǎng)膜感受器沖動的神經(jīng)纖維跨越視網(wǎng)膜表面,，經(jīng)由視神經(jīng)到達出口。視網(wǎng)膜的分辨力是不均勻的,，在黃斑區(qū),，其分辨能力*。視網(wǎng)膜色素上皮（RPE）位于脈絡(luò)膜和光感受器細胞外節(jié)之間,，是視網(wǎng)膜下腔和脈絡(luò)膜血管之間的離子,、水、營養(yǎng)物質(zhì)和代謝終產(chǎn)物轉(zhuǎn)運通道,；主要是由單層色素上皮細胞所構(gòu)成,，排列十分規(guī)則。視網(wǎng)膜色素上皮參與視黃醇循環(huán),，吞噬脫落的光感受器細胞外節(jié)以維持光感受器細胞興奮性,，并分泌多種生長因子，幫助維持脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細胞和光感受器細胞的結(jié)構(gòu)完整性,。細胞呈多角形,，細胞分為三部分，即頂部,、體部和基底部,。視網(wǎng)膜色素上皮細胞無再生能力，細胞死亡后不被替換,，而是鄰近的細胞向側(cè)面滑動,，以填補死亡細胞遺留下來的空間。視網(wǎng)膜色素上皮位于脈絡(luò)膜和光感受器細胞外節(jié)之間,，是視網(wǎng)膜下腔和脈絡(luò)膜血管之間的離子、水,、營養(yǎng)物質(zhì)和代謝終產(chǎn)物轉(zhuǎn)運通道,。視網(wǎng)膜色素上皮參與視黃醇循環(huán)，吞噬脫落的光感受器細胞外節(jié)以維持光感受器細胞興奮性,，并分泌多種生長因子,，幫助維持脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細胞和光感受器細胞的結(jié)構(gòu)完整性,。 5.方法簡介： 實驗室分離的兔視網(wǎng)膜色素上皮細胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的兔視網(wǎng)膜色素上皮細胞經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） 培養(yǎng)基含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-Rb003 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)上皮細胞樣 傳代特性可傳2-3代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%；CO2,，5% |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄,，易碎,，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率,；
5．如果細胞貼壁生長能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大小,；
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2,、PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,；
5,、PBS沖洗細胞3次，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h；
6,、用PBS沖洗3次,，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
REG3A 基因全長ORF克隆
REG1A 基因全長ORF克隆
SMYD3 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長ORF克隆
SEMA5A 基因全長ORF克隆
APRT 基因全長ORF克隆
SAA1 基因全長ORF克隆
CLU 基因全長ORF克隆
FLRT2 基因全長ORF克隆
ATIC 基因全長ORF克隆
AKR1B1 基因全長ORF克隆
兔視網(wǎng)膜色素上皮細胞0.156-10 ng/ml ELISA Kit for Human Alpha-2-macroglobulin
0.156-10 ng/mL 人醛酮還原家族1成員C4(AKR1C4)ELISA試劑盒
0.312-20 ng/mL 轉(zhuǎn)基因植物NPTⅡ基因核酸檢測試劑盒
支原體肉湯培養(yǎng)基 英文名稱：Mycoplasma Broth Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g
0.156-10 ng/mL 人G蛋白信號10調(diào)節(jié)物(RGS-10)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL 人環(huán)腺苷特異性二酯4B(PDE-4B)ELISA試劑盒
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Taste receptor type 2 member 38
15.6-1000 pg/mL 人心型脂肪酸結(jié)合蛋白(h-FABP)ELISA試劑盒
15.6-1000 pg/mL 人音猬因子(Shh)ELISA試劑盒
ISP培養(yǎng)基3 英文名稱：ISP Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g
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