詳細介紹
冷凍保存細胞之方法,?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時,, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,,惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
NCTC 1469 (小鼠正常肝細胞) | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0405 |
商品介紹:
名稱 NCTC 1469 (小鼠正常肝細胞) 別稱NCTC clone 1469; NCTC1469 種屬小鼠 年齡(性別)新生 組織來源肝臟 生長特性半貼半懸 細胞形態(tài)圓形 背景描述NCTC 1469細胞是于1952年建系,,源于正常C3H/An小鼠的肝臟組織,;NCTC 1469細胞可表達H-2K抗原,鼠痘病毒陰性,。 生物安全等級1 生長培養(yǎng)基DMEM+10% HS+1% P/S 推薦傳代比例1:2-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度:液氮 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,,95%;CO2,,5% 溫度:37℃ |
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),,而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法,;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,,易碎,,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,,可以使用較大的培養(yǎng)皿,,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率,;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一,、分離與培養(yǎng):
1,、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,,然后用PBS將此組織塊清洗2次,,將成1mm3左右大小,;
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,,置37℃條件下消化10min,,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,,混懸10s,,置37℃消化10 min后,,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,,直至組織*被消化,;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,,1200r/min 離心10min,,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
5,、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),;
二、免疫熒光鑒定:
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時,,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,,每次10min,,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2,、PBS沖洗細胞2次,,每次10min,然后在4℃條件下,,用0.1%Triton X-100透膜15min,;
3、PBS沖洗細胞2次,,每次10min,,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min,;
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,;
5,、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗,, 37℃條件下放置1h,;
6、用PBS沖洗3次,,每次10min,,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
GRPEL2 基因全長ORF克隆
MXD1 基因全長ORF克隆
HIST1H1A 基因全長ORF克隆
RAB4B 基因全長ORF克隆
HIST1H1T 基因全長ORF克隆
RGS8 基因全長ORF克隆
ARPC3 基因全長ORF克隆
NPM3 基因全長ORF克隆
DLX6 基因全長ORF克隆
LCN6 基因全長ORF克隆
NCTC 1469 (小鼠正常肝細胞)100mL 非凍型血液DNA保存液 Blood DNALOCKER 室溫
2 ug pDsRed-C1 pDsRed-C1 低溫運輸,,-20℃保存
MCP瓊脂 MCP Agar 250g
100mL 交聯(lián)瓊脂糖凝膠 6B Sepharose CL-6B 4-8℃保存
50T 星狀病毒PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存
200 mL 大鼠白細胞分離液1.084 Cell Separation Solution -20℃保存
100mL GTE Buffer,pH8.0 GTE Buffer,pH8.0 常溫保存