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詳細(xì)介紹
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄,，易碎,，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率,；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| 小鼠海綿體平滑肌細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1321 |
商品介紹：
名稱(chēng) 小鼠海綿體平滑肌細(xì)胞 2.組織來(lái)源：海綿體組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介： 小鼠海綿體平滑肌細(xì)胞分離自海綿體組織,；海綿體,，又稱(chēng)海綿體肌,，是最硬的平滑肌和結(jié)締組織。海綿體是一種勃起組織,，外面包有堅(jiān)厚的白膜,，內(nèi)部由結(jié)締組織和平滑肌組成海綿狀支架，其腔隙與血管相通,。它主要包括海綿體內(nèi)皮細(xì)胞,、平滑肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞3種細(xì)胞成分。其中平滑肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞鑲嵌于海綿體細(xì)胞外基質(zhì)的膠原中,，在消化海綿體組織時(shí),，膠原酶的作用主要是松解海綿體內(nèi)皮細(xì)胞與基膜的聯(lián)系，破壞海綿體內(nèi)皮細(xì)胞間的緊密連接,。因此可用膠原酶分離出海綿體平滑肌細(xì)胞,。平滑肌，是非橫紋肌的肌肉組織,。分布在人體動(dòng)脈和靜脈血管壁,、膀胱、子宮,、男性和女性生殖道,、消化道、呼吸道,、眼睛的睫狀肌和虹膜,。平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見(jiàn)細(xì)胞貼壁伸展,，細(xì)胞形態(tài)大小不一,，呈梭形、不規(guī)則形,、三角形或扇形,，核卵圓形、居中,；2周后細(xì)胞匯合,，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形，胞漿豐富,，有分枝狀突起,，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng)，高低起伏,；細(xì)胞密度低時(shí),，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí),，則排列為旋渦狀或柵欄狀,。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快,，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn),。 5.方法簡(jiǎn)介： 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠海綿體平滑肌細(xì)胞采用膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測(cè)： 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠海綿體平滑肌細(xì)胞經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS,、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-M218 換液頻率每2-3天換液一次 生長(zhǎng)特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣 傳代特性可傳1-3代左右 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%,；CO2，5% |
冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí),， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1,、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大小,；
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s,，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4,、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
大鼠 GFRA1 / GFR alpha-1 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
大鼠 GM-CSF / CSF2 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
狗 TrkA / NTRK1 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
狗 TrkA / NTRK1 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
狗 Ephrin-B2 / EFNB2 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
狗 GFRA1 / GFR alpha-1 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
狗 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
狗 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
狗 VEGF / VEGFA 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
小鼠 FLT-3 / CD135 / FLK-2 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
小鼠海綿體平滑肌細(xì)胞胸腺核蛋白1抗體Anti-KCNA6 Antibody小鼠肺大靜脈內(nèi)皮*培養(yǎng)基品牌
腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)相互作用蛋白3抗體Anti-KCND1 Antibody大鼠表皮黑色素*培養(yǎng)基圖片
辣椒素受體3抗體Anti-KCNH1 Antibody大鼠管內(nèi)皮*培養(yǎng)基說(shuō)明書(shū)
TEX261蛋白抗體Anti-KCND2 Antibody小鼠支氣管上皮*培養(yǎng)基品牌
促甲狀腺素受體抗體Anti-KCND3 Antibody大鼠雪旺氏*培養(yǎng)基圖片
化激A抗體Anti-KCNH1 Antibody大鼠腸上皮*培養(yǎng)基價(jià)格
Toll樣受體3抗體Anti-KCNIP2 Antibody大鼠腸動(dòng)脈內(nèi)皮*培養(yǎng)基圖片
T受體γ抗體Anti-KCNH2 Antibody大鼠成纖維*培養(yǎng)基品牌
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