實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),,而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),,懸浮細(xì)胞可使用滴片法,;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,,并經(jīng)過鉻酸洗液處理,;
3.蓋玻片非常薄,,易碎,取放蓋玻片時動作要輕,;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,,但不宜過大,,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
大鼠牙乳頭細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1081 |
商品介紹:
名稱 大鼠牙乳頭細(xì)胞 2.組織來源:牙乳頭組織 3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡介: 大鼠牙乳頭細(xì)胞分離自牙乳頭組織;牙乳頭細(xì)胞來源于外胚間充質(zhì),,具有多向分化潛能,,是體內(nèi)分化為成牙本質(zhì)細(xì)胞的前體細(xì)胞,該細(xì)胞在牙發(fā)育和牙體牙髓損傷修復(fù)過程中起重要作用。牙乳頭細(xì)胞為未分化的間充質(zhì)細(xì)胞,,有少量微細(xì)的膠原纖維分散在細(xì)胞外間隙,。在鐘狀期,被成釉器凹陷部包圍的外胚間葉組織增多,,并出現(xiàn)細(xì)胞的分化,。在內(nèi)釉上皮的誘導(dǎo)下,牙乳頭外層細(xì)胞分化為高柱狀的成牙本質(zhì)細(xì)胞,。這些細(xì)胞在切緣或牙尖部為柱狀,,在牙頸部細(xì)胞尚未分化成熟,為立方狀,。牙乳頭在牙發(fā)育中有重要作用?,F(xiàn)已證明,牙乳頭是決定牙形狀的重要因索,。例如,,將切牙的成釉器與磨牙的牙乳頭重新組合,結(jié)果形成磨牙,;與此相反,,切牙的牙乳頭與磨牙成釉器重新組合,結(jié)果形成切牙,。牙乳頭還可以誘導(dǎo)非牙源性的口腔上皮形成成釉器,。 5.方法簡介: 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠牙乳頭細(xì)胞采用混合膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質(zhì)量檢測: 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠牙乳頭細(xì)胞經(jīng)膠原蛋白Ⅰ,,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息: 培養(yǎng)基含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-R125 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)梭形,、多角形 傳代特性可傳1-2代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相:空氣,,95%;CO2,,5% |
冷凍保存細(xì)胞之方法,?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時,, 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,,惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一,、分離與培養(yǎng):
1,、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,,然后用PBS將此組織塊清洗2次,,將成1mm3左右大小,;
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,,置37℃條件下消化10min,,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,,混懸10s,,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,,重復(fù)此步驟2-3次,,直至組織*被消化;
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,,1200r/min 離心10min,棄去上清,,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5,、差速貼壁1h后,,吸出培養(yǎng)基,,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二,、免疫熒光鑒定:
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,;
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后在4℃條件下,,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,然后在室溫條件下,,用4% BSA封閉細(xì)胞30min,;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,,每次10min,,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h,;
6,、用PBS沖洗3次,每次10min,,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
甲型流感 H3N8 (equine/Gansu/7/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)(表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
甲型流感 H3N2 (Moscow/10/1999) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)(表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
甲型流感 H3N2 (Babol/36/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)(表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
甲型流感 H3N2 (Guangdong-Luohu/1256/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)(表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
甲型流感 H3N2 (Victoria/208/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)(表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
甲型流感 H3N2 (Victoria/210/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)(表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
甲型流感 H3N2 (Sydney/5/1997) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)(表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
甲型流感 H3N2 (Hong Kong/CUHK31987/2011) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)(表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
甲型流感 H3N2 (Victoria/361/2011) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)(表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
甲型流感 H3N2 (Wisconsin/15/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)(表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
大鼠牙乳頭細(xì)胞0.156-10 ng/mL 人ADP/ATP移位1(ADP/ATP translocase 1)ELISA試劑盒
沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基管 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:10ml*20支/包
0.156-10 ng/mL 人VII型膠原蛋白α-1鏈(Collagen alpha-1(VII) chain)ELISA試劑盒
1.56-100 ug/mL 人αL艾杜糖苷酸(IDUA)ELISA試劑盒
心浸液瓊脂 英文名稱:Heart Infusion Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Calcium/calmodulin-dependent protein kinase kinase 2
15.6-1000 pg/mL 漢坦病毒Ⅱ型(HTV-Ⅱ)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法)
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human [Pyruvate dehydrogenase [lipoamide]] kinase isozyme 1, mitochondrial
伊紅美藍(lán)瓊脂(顆粒) 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:250g
78-5000 pg/mL 人顆粒體蛋白ELISA試劑盒