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詳細(xì)介紹
冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大,，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| LN229 (大腦神經(jīng)母瘤細(xì)胞) | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0565 |
商品介紹：
名稱 LN229 (大腦神經(jīng)母瘤細(xì)胞) 別稱LN 229; LN229; LNT-229 種屬人類 年齡（性別）女性,，60歲 組織來源大腦/右額葉頂枕葉皮質(zhì) 生長特性貼壁細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣 背景描述The LN229 [LN-229; LNT-229] cell line was Established in 1979 from cells taken from a patient with right frontal parieto-occipital glioblastoma [PubMed. 10416987]. 生物安全等級1 生長培養(yǎng)基DMEM＋5% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:5 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時間~31小時 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5% 溫度：37℃ 致瘤性Yes, forms tumors in nude mice. |
實(shí)驗要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄,，易碎,，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率,；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗報告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大小,；
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s,，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min，棄去上清,，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實(shí)驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二,、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,；
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h；
6,、用PBS沖洗3次，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
KDM1A / KDM1 基因全長ORF克隆
DEFA1 基因全長ORF克隆
PROL1 基因全長ORF克隆
MDFIC 基因全長ORF克隆
COL9A3 基因全長ORF克隆
APLP1 基因全長ORF克隆
MOXD1 基因全長ORF克隆
QSOX1 基因全長ORF克隆
MXRA8 基因全長ORF克隆
SCPEP1 基因全長ORF克隆
LN229 (大腦神經(jīng)母瘤細(xì)胞) 明膠液化生化管（軍團(tuán)菌） 20支/盒
1瓶 A-427細(xì)胞株 A-427 低溫運(yùn)輸和保存
5次 一站式大提柱式miRNAout Maxi Column miRNAOUT 4℃保存
100mL 茜素紅S染色試劑盒 Alizarin Red S Staining Kit 常溫保存
100mL MOPS Buffer,0.5M,pH5.5 MOPS Buffer,0.5M,pH5.5 常溫保存
100次 古細(xì)菌種屬鑒定 PCR Mix 1（rDNA） Bacterial DNA Barcoding PCR Mix -20℃保存
2 ug pmCherry-LC3 pmCherry-LC3 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
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