化工儀器網
詳細介紹
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃,，并經過鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄，易碎,，取放蓋玻片時動作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大,，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
產品屬性：
產品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| COS-7 (非洲綠猴SV40轉化的腎細胞) | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0069 |
商品介紹：
名稱 COS-7 (非洲綠猴SV40轉化的腎細胞) 別稱Cos-7; COS7; Cos7; CV-1 in Origin Simian-7 種屬綠猴 年齡（性別）成年 組織來源腎；SV40轉染 生長特性貼壁細胞 細胞形態(tài)成纖維細胞樣 背景描述COS-7細胞源自CV-1細胞,，經帶有編碼野生型T抗原的起始失活突變的SV40轉染得到,。COS-7細胞含有一個來自SV40基因組全部早期區(qū)域的組成型拷貝。 生物安全等級2 生長培養(yǎng)基DMEM＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時間~35-48小時 凍存條件 凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5% 溫度：37℃ 基因表達情況T antigen |
冷凍保存細胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大小,；
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s,，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清,，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二,、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,；
2,、PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3,、PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細胞30min,；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,；
5,、PBS沖洗細胞3次，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h；
6,、用PBS沖洗3次,，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
信號傳導子及轉錄激活子1(STAT1)免疫試劑盒現貨供應
小鼠C肽(C-Peptide)免疫試劑盒現貨供應
小鼠花生四烯酸12 - 脂氧合,12S型(Alox12/Alox12p)免疫試劑盒現貨供應
豬(SS)免疫試劑盒進口,、組裝
大鼠β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42)免疫試劑盒*直銷
β4整合素(ITG β4/CD104)免疫試劑盒*直銷
小鼠趨化因子配體1(CCL1)免疫試劑盒現貨供應
大鼠Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)免疫試劑盒進口、分裝
豬白介素17(IL-17)免疫試劑盒進口,、分裝
兔子線粒體呼吸鏈復合體Ⅴ 免疫試劑盒進口,、組裝
COS-7 (非洲綠猴SV40轉化的腎細胞)1瓶 Fox-NY細胞株 Fox-NY 低溫運輸和保存
含225ml7.5%氯化鈉肉湯均質袋 7.5% NaCl Broth 10個/包
500 U 限制性內切DpnI Restriction Endonuclease -20℃保存
250mL Potassium Phosphate Solution，0.5M, pH7.6 Potassium Phosphate Solution,，0.5M, pH7.6 常溫保存
10mL 溶液,50mg/mL Spectinomycin Solution 4℃避光干燥保存
2 ug pQE-30LacIq pQE-30LacIq 低溫運輸,，-20℃保存
3%NaCl阿拉伯糖 20支
化工儀器網