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詳細介紹
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大,，造成細胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些,。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| NCI-H23 (非小細胞肺癌細胞) | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0395 |
商品介紹：
名稱 NCI-H23 (非小細胞肺癌細胞) 別稱NCI.H23; NCI H23; H23; H-23; NCIH23 種屬人類 年齡（性別）男性,，51歲 組織來源肺 生長特性貼壁細胞 細胞形態(tài)上皮細胞樣 背景描述NCI-H23細胞源于一位51歲患有非小細胞肺癌黑人男性患者的治療前的腫瘤組織，表達C-myc,、L-myc,、v-src、v-abl,、v-erbB,、c-raf 1、Ha-ras,、Ki-ras,、N-ras RNAs；NCI-H23細胞攜帶K-ras 12突變,；p53基因246位密碼子突變ATC→ATG,；表達PDGF A和B鏈的異源mRNA；表達TGFα,、TGFβ和EGFR,；角蛋白5、8和18陽性,，波形蛋白陽性,，神經(jīng)絲蛋白陰性，巴脫氫酶陰性,；據(jù)報道,，NCI-H23細胞在軟瓊脂中形成克隆的效率為9.7%。 生物安全等級1 生長培養(yǎng)基RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時間~38小時 凍存條件 凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5% 溫度：37℃ 基因表達情況myc+; src+; abl+; erb+; ras+; sis - |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄，易碎,，取放蓋玻片時動作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大,，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率,；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
實驗報告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s,，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液,，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化,；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min,，棄去上清,，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5,、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,；
2、PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3,、PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細胞30min；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5,、PBS沖洗細胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
ZNRF1 基因全長ORF克隆
RTP2 基因全長ORF克隆
GSTM5 基因全長ORF克隆
NACA2 基因全長ORF克隆
MREG 基因全長ORF克隆
FRMD3 基因全長ORF克隆
MED20 基因全長ORF克隆
EFCAB1 基因全長ORF克隆
RAB1B 基因全長ORF克隆
CT45A5 基因全長ORF克隆
NCI-H23 (非小細胞肺癌細胞) 1瓶 Ramos細胞株 Ramos 低溫運輸和保存
胰蛋白胨大豆瓊脂 5kg/袋
1瓶 Malme-3M細胞株 Malme-3M 低溫運輸和保存
250mL Yeast Lysis Buffer (for mini prep) Yeast Lysis Buffer (for mini prep) 常溫保存
5g 辛甲基硫吡喃葡萄糖苷 OTG 常溫保存
2 ug pVgRXR pVgRXR 低溫運輸,，-20℃保存
50次 磁珠植物DNAout MAG Plant DNAOUT 常溫保存（磁珠4℃保存）
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