冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時,, 以防止冰晶過大,,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,,惟存活率稍微降低一些。

產(chǎn)品屬性:
商品介紹:
名稱 PC-3M-2B4 (前列腺癌低轉(zhuǎn)移細胞株) 別稱PC-3M 2B4; PC3M-2B4; 2B4-L 年齡(性別)62歲 生長特性貼壁細胞 細胞形態(tài)上皮細胞樣,;多角形 背景描述PC-3M-2B4細胞是一株由母系細胞PC-3M經(jīng)單細胞克隆法分離鑒定的低轉(zhuǎn)移亞系,;PC-3M-2B4細胞在裸鼠體內(nèi)成瘤率87.5%,不轉(zhuǎn)移,。 生長培養(yǎng)基RPMI-1640+10% FBS+1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度:液氮 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,,95%;CO2,,5% 溫度:37℃ |
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),,而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法,;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,,易碎,,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,,可以使用較大的培養(yǎng)皿,,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率,;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1,、無菌條件下,,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,,將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),,混懸10s,置37℃條件下消化10min,,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,;
3,、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,,置37℃消化10 min后,,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,,直至組織*被消化,;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,,1200r/min 離心10min,,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
5,、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),;
二、免疫熒光鑒定:
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時,,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,;
2、PBS沖洗細胞2次,,每次10min,,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min,;
3,、PBS沖洗細胞2次,每次10min,,然后在室溫條件下,,用4% BSA封閉細胞30min;
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5,、PBS沖洗細胞3次,,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗,, 37℃條件下放置1h,;
6、用PBS沖洗3次,,每次10min,,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
TGIF2 基因全長ORF克隆
RGS18 基因全長ORF克隆
IDI2 基因全長ORF克隆
CLRN3 基因全長ORF克隆
RAB2B 基因全長ORF克隆
ABCA3 基因全長ORF克隆
RAB8B 基因全長ORF克隆
ARL15 基因全長ORF克隆
HPGDS 基因全長ORF克隆
NRSN1 基因全長ORF克隆
PC-3M-2B4 (前列腺癌低轉(zhuǎn)移細胞株)1瓶 CL-187[LS180]細胞株 CL-187[LS180] 低溫運輸和保存
R2A瓊脂 R2A Agar 250g
4mg 神經(jīng) ( 梭菌 ) Neuraminidase 4℃保存
100mL TE Buffer,50X,pH7.6 TE Buffer,50X,pH7.6 常溫保存
50次 化蛋白純化試劑盒
2 ug pSPL3 pSPL3 低溫運輸,,-20℃保存
1.5mL 非DNA清除劑 DNA Erasol 4℃保存