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詳細介紹
冷凍保存細胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大,，造成細胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 結(jié)腸平滑肌細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0829 |
商品介紹：
名稱 結(jié)腸平滑肌細胞 2.組織來源：結(jié)腸組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 人結(jié)腸平滑肌細胞分離自結(jié)腸組織,；結(jié)腸在右髂窩內(nèi)續(xù)于盲腸,，在第3骶椎平面連接直腸。結(jié)腸分升結(jié)腸、橫結(jié)腸,、降結(jié)腸和乙狀結(jié)腸4部分,，大部分固定于腹后壁，結(jié)腸的排列酷似英文字母“M",，將小腸包圍在內(nèi),。結(jié)腸橫切面由內(nèi)到外依次為：黏膜（上皮層、固有層,、黏膜肌層）,，黏膜下層（疏松結(jié)締組織），肌層（內(nèi)環(huán)形,、外縱行兩層平滑?。饽ぃɡw維膜或漿膜）,。結(jié)腸平滑肌細胞主要分布于黏膜肌層和肌層的內(nèi)環(huán)形,、外縱行平滑肌,；結(jié)腸運動少而緩慢,，對刺激的反應也較遲緩。結(jié)腸平滑肌在食物消化與吸收,、腸道運動和物質(zhì)分泌,、誘發(fā)全身炎癥反應以及細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導途徑等研究中起著重要的作用。結(jié)腸平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后,，可見細胞貼壁伸展,，細胞形態(tài)大小不一，呈梭形,、不規(guī)則形,、三角形或扇形，核卵圓形,、居中,；2周后細胞匯合，多數(shù)細胞伸展呈長梭形,，胞漿豐富,，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,，高低起伏,；細胞密度低時，常交織成網(wǎng)狀,；密度高時,，則排列為旋渦狀或柵欄狀,。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合,，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點,。結(jié)腸平滑肌運動活性受到神經(jīng)遞質(zhì)、胃腸激素和藥物等因素的調(diào)節(jié),。隨著現(xiàn)代胃腸動力學研究的進展,，對胃腸運動的研究已從器官、組織水平發(fā)展到細胞,、分子水平,，要求在胃腸道單個平滑肌細胞標本上來完成各種電生理、藥理和分子生物學等實驗,。體外培養(yǎng)細胞,，由于影響因素單一，是研究細胞功能以及相應的細胞信號轉(zhuǎn)導機制的基礎,。 5.方法簡介： 實驗室分離的人結(jié)腸平滑肌細胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的人結(jié)腸平滑肌細胞經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-H037 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)成纖維細胞樣 傳代特性可傳5代左右,；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%；CO2,，5% |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄,，易碎,，取放蓋玻片時動作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大,，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二,、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,；
2、PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3,、PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細胞30min；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5,、PBS沖洗細胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
小鼠 ACPP 基因全長ORF克隆
小鼠 ACTA1 基因全長ORF克隆
小鼠 CCNB2 基因全長ORF克隆
小鼠 ACO2 基因全長ORF克隆
小鼠 NPY 基因全長ORF克隆
小鼠 WBSCR22 基因全長ORF克隆
小鼠 HIST3H2A 基因全長ORF克隆
小鼠 CDK5R1 基因全長ORF克隆
小鼠 CCND2 基因全長ORF克隆
小鼠 H1F0 基因全長ORF克隆
結(jié)腸平滑肌細胞采樣吸收液1-GVPC液體培養(yǎng)基 英文名稱：GVPC Liquid Medium 產(chǎn)品規(guī)格：100g
0.312-20 ng/mL 人β位淀粉樣前體蛋白裂解2(BACE2)ELISA試劑盒
78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Sphingosine-1-phosphate lyase 1
NAC液體培養(yǎng)基 英文名稱：NAC Solid Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g
0.625-40 ng/mL ELISA Kit for Human Fibroblast growth factor 4
15.6-1000 pg/mL 人胱硫醚β合成(CBS)ELISA試劑盒
1.56-100 ng/ml ELISA Kit for Human Serpin B13
0.156-10 ng/mL 人DNA(無/無堿基位點)裂解（APEX1）ELISA試劑盒
3%NaCl堿性蛋白胨水 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：9ml*10支
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human 1-phosphatidylinositol-4, 5-bisphosphate phosphodiesterase gamma-1
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