詳細介紹
冷凍保存細胞之方法,?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,,造成細胞大量死亡,,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,,惟存活率稍微降低一些,。
產品屬性:
產品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
大鼠胚胎肢芽間充質干細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1405 |
商品介紹:
名稱 大鼠胚胎肢芽間充質干細胞
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實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),,懸浮細胞可使用滴片法,;
2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃,并經過鉻酸洗液處理,;
3.蓋玻片非常薄,,易碎,取放蓋玻片時動作要輕,;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率,;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
實驗報告:
一,、分離與培養(yǎng):
1,、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,,然后用PBS將此組織塊清洗2次,,將成1mm3左右大小,;
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,,置37℃條件下消化10min,,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,,混懸10s,,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,,重復此步驟2-3次,,直至組織*被消化;
4,、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,,1200r/min 離心10min,棄去上清,,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
5、差速貼壁1h后,,吸出培養(yǎng)基,,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二,、免疫熒光鑒定:
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,,用溫育的PBS沖洗細胞2次,,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,;
2,、PBS沖洗細胞2次,,每次10min,然后在4℃條件下,,用0.1%Triton X-100透膜15min,;
3、PBS沖洗細胞2次,,每次10min,,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min,;
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,;
5,、PBS沖洗細胞3次,每次10min,,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗,, 37℃條件下放置1h;
6,、用PBS沖洗3次,,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
spike glycoprotein (aa 1-760) 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 TSLP 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
甲型流感 H5N1 (A/Hubei/2011) 神經 (Neuraminidase / NA) 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 PIGF / PLGF 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 NKR-P1A / Klrb1a 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 CHODL / CHOndrolectin 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 CD302 / CLEC13A 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 CD302 / CLEC13A 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 CLEC10A / MGL1 / CD301 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 ADAM9 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠胚胎肢芽間充質干細胞鐿粉 99.9%3-乙酰氧基-2-丁酮 98%MHB(Human Methemoglobin) ELISA Kit 人高鐵血紅蛋白
金屬釔 99.9%,,粉末4-乙酰氧基-2, 5-二甲基 -3-呋喃酮 98%LMWH(Human low molecular weight heparin) ELISA Kit 人低分子肝素
雙(頻哪合)二 98%硫代銨 99%C3SP(Human Complement 3 split product) ELISA Kit 人補體3裂解產物
6-溴-2-四氫萘酮 97%硫代銨 98%C3bR(Human Complement fragment 3b rccptor) ELISA Kit 人補體片段3b受體
(R)-4-芐基-2-惡唑烷酮 98%偶氮苯 97%C1INH(Human Complement 1 inhibitor autoantibody) ELISA Kit 人補體1抑制物抗體
4-二氫色原酮 97%偶氮苯 分析標準品BF(Human factor B) ELISA Kit 人B因子
(R)-2,5-二氫-3,,6-二甲氧基-2-異基吡 97%吖酮 98%HLA-G(Human leukocyte antigen G) ELISA Kit 人類白抗原G
(S)-2,,5-二氫-3,6-二甲氧基-2-異基吡 97%溴化乙酰 98%C3b(Human Complement fragment 3b) ELISA Kit 人補體片斷3b