產(chǎn)品屬性:
商品介紹:
名稱 兔肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞 2.組織來源:肺組織 3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介: 兔肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自肺組織;肺是機(jī)體的呼吸器官,位于胸腔,,左右各一,覆蓋于心之上,。肺有分葉,,左二右三,共五葉,。肺經(jīng)肺系(指氣管,、支氣管等)與喉、鼻相連,,故稱喉為肺之門戶,,鼻為肺之外竅。微血管內(nèi)皮細(xì)胞密切參與包括再生,、發(fā)育,、傷口愈合等一系列生理及炎癥反應(yīng),。細(xì)胞呈梭形或多角形,形成單層后呈鵝卵石樣或鋪路石樣排列,。肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成半選擇性屏障,,該屏障對(duì)于肺氣體交換,調(diào)節(jié)液體和可溶物在血液與肺間質(zhì)之間的流動(dòng)具有重要意義,。 5.方法簡(jiǎn)介: 實(shí)驗(yàn)室分離的兔肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞采用組織貼塊法并結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測(cè): 實(shí)驗(yàn)室分離的兔肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)CD31免疫熒光鑒定,,純度可達(dá)90%以上,,且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息: 包被條件PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%) 培養(yǎng)基含FBS,、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-Rb006 換液頻率每2-3天換液一次 生長(zhǎng)特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)內(nèi)皮細(xì)胞樣 傳代特性可傳2-3代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相:空氣,,95%,;CO2,5% |
冷凍保存細(xì)胞之方法,?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。*-20 ℃不可超過1 小時(shí),, 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,,惟存活率稍微降低一些。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),,而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),,懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,,并經(jīng)過鉻酸洗液處理,;
3.蓋玻片非常薄,易碎,,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕,;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率,;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一,、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),,混懸10s,,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,,自然沉淀并收集上清,,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3,、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,,混懸10s,置37℃消化10 min后,,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化,;
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,,棄去上清,,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
5,、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),;
二,、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),,棄去培養(yǎng)基,,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min,;
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后在室溫條件下,,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4,、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗,, 37℃條件下放置1h,;
6、用PBS沖洗3次,,每次10min,,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
BIRC3 基因全長(zhǎng)ORF克隆
TFR2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
TFRC 基因全長(zhǎng)ORF克隆
TF 基因全長(zhǎng)ORF克隆
CSNK2A2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
GPR56 基因全長(zhǎng)ORF克隆
HK3 基因全長(zhǎng)ORF克隆
CROT 基因全長(zhǎng)ORF克隆
ANGPTL2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
CCNA1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
兔肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞0.78-50 ng/mL 人胰島再生源蛋白3 - alpha(REG-3-alpha)ELISA試劑盒
78-5000 pg/mL 人組織蛋白F(CATSF)ELISA試劑盒
LG培養(yǎng)基 英文名稱:(Linden Grain Medium) 產(chǎn)品規(guī)格:250g
硫細(xì)菌培養(yǎng)基 英文名稱:Medium-sulfur bacteria 產(chǎn)品規(guī)格:250g
1.56-100 ng/mL ELISA Kit for Human Nicotinamide phosphoribosyltransferase
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Perilipin-1
0.312-20 ng/mL. 人白細(xì)胞彈性蛋白抑制劑(LEI)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Procollagen galactosyltransferase 1
78-5000 pg/mL 人神經(jīng)介素U(NMU)ELISA試劑盒
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human RuvB-like 1