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詳細介紹
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄,，易碎，取放蓋玻片時動作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大,，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率,；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 小鼠腹腔巨噬細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1087 |
商品介紹：
名稱 小鼠腹腔巨噬細胞 2.組織來源：腹腔液 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 小鼠腹腔巨噬細胞分離自腹腔,；腹腔，即軀干腹部的腔,，內(nèi)襯腹膜,，由體壁、橫膈膜和盆底圍成,，其內(nèi)容納胃,、肝、膽囊,、脾臟,、胰、腎臟,、腸,、闌尾、膀胱,、泌尿系和婦科(子宮,、附件)等其他內(nèi)臟器官。巨噬細胞屬免疫細胞,，有多種功能,，是研究細胞吞噬,、細胞免疫和分子免疫學(xué)的重要對象。巨噬細胞較易獲得,，便于培養(yǎng),，并可進行純化。巨噬細胞屬不繁殖細胞群,，在條件適宜下可生活2-3周,，多用做原代培養(yǎng),，難以長期生存,。巨噬細胞(Macrophages)是一種位于組織內(nèi)的白血球，源自單核細胞,，而單核細胞又來源于骨髓中的前體細胞,。巨噬細胞和單核細胞皆為吞噬細胞，在脊椎動物體內(nèi)參與非特異性防衛(wèi)(先天性免疫)和特異性防衛(wèi)(細胞免疫),。它們的主要功能是以固定細胞或游離細胞的形式對細胞殘片及病原體進行噬菌作用(即吞噬以及消化),，并激活淋巴球或其他免疫細胞，令其對病原體作出反應(yīng),。巨噬細胞功能及其在疾病發(fā)生過程中的作用是目前研究的熱點問題之一,；腹腔巨噬細胞的吞噬、免疫和分泌作用都十分活躍,，有重要防御功能,。 5.方法簡介： 實驗室分離的小鼠腹腔巨噬細胞采用反復(fù)往腹腔注射培養(yǎng)基并抽取的方法結(jié)合差速貼壁制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的小鼠腹腔巨噬細胞經(jīng)CD68免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-M128 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)巨噬細胞樣 傳代特性屬于終末分化細胞,；屬于不增殖細胞群 培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%；CO2,，5% |
冷凍保存細胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大小,；
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s,，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,，1200r/min 離心10min，棄去上清,，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2,、PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3,、PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細胞30min,；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,；
5、PBS沖洗細胞3次,，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h,；
6,、用PBS沖洗3次，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
小鼠 ADIPOQ 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標(biāo)簽
小鼠 CTLA4 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標(biāo)簽
小鼠 CTLA4 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標(biāo)簽
小鼠 PDGFA 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標(biāo)簽
小鼠 PDGFA 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標(biāo)簽
小鼠 B7-1 / CD80 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標(biāo)簽
小鼠 B7-1 / CD80 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標(biāo)簽
小鼠 CD5 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標(biāo)簽
小鼠 TIMD4 / TIM4 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標(biāo)簽
小鼠 BAFF / TNFSF13B 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標(biāo)簽
小鼠腹腔巨噬細胞0.156-10 ng/mL 人組蛋白H4(Histone H4)ELISA試劑盒
0.312-20 ug/mL ELISA Kit for Human Macrosialin
含青的TSA表面接觸皿（55cm） 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：10個/包
62.5-4000 pg/mL 人白介素22(IL-22)ELISA試劑盒
31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Muscarinic acetylcholine receptor M3
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Prostate-specific antigen
沙門氏志賀氏增菌液管 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：9ml*20支/包
3.12-200 ng/mL ELISA Kit for Human C-terminal propeptide of Collagen alpha-1(II) chain
0.312-20 ng/mL 腦膜炎奈瑟菌C群(NM-C)核酸檢測試劑盒
0.312-20 ng/mL 人髓磷脂堿性蛋白(MBP)ELISA試劑盒
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