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詳細介紹
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大,，造成細胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些,。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 冠狀動脈平滑肌細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1189 |
商品介紹：
名稱 冠狀動脈平滑肌細胞 2.組織來源：冠狀動脈 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 人冠狀動脈平滑肌細胞分離自冠狀動脈組織,；冠狀動脈是供給心臟血液的動脈，起于主動脈根部,，分左右兩支,，行于心臟表面。采用Schlesinger等的分類原則,，將冠狀動脈的分布分為三型：右優(yōu)勢型,、均衡型、左優(yōu)勢型,。左右冠狀動脈是升主動脈的第一對分支,。左冠狀動脈為一短干,，發(fā)自左主動脈竇，經(jīng)肺動脈起始部和左心耳之間,，沿冠狀溝向左前方行后,，立即分為前室間支和旋支。前室間支沿前室間溝下行,，旋支繞過心尖切跡至心的膈面與右冠狀動脈的后室間支相吻合,。它是構(gòu)成冠狀動脈壁的主要細胞成分，細胞膜上分布著多種離子通道,，如電壓依賴性Na+通道,、多種Ca2+通道和K+通道；它們參與了靜息電位的維持與細胞膜電位的復(fù)極化,、超極化,，調(diào)節(jié)血管平滑肌的收縮及舒張功能，此外動脈粥樣硬化的發(fā)展也涉及冠狀動脈平滑肌細胞增殖,、炎癥及凋亡等,。因此，原代分離培養(yǎng)的冠狀動脈平滑肌細胞,，對研究生理和病理狀態(tài)下離子通道及血管張力變化機制具有非常重要的作用,。冠狀動脈平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展,，細胞形態(tài)大小不一,，呈梭形、不規(guī)則形,、三角形或扇形,，核卵圓形、居中,；2周后細胞匯合,，多數(shù)細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富,，有分枝狀突起,，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏,；細胞密度低時,，常交織成網(wǎng)狀；密度高時,，則排列為旋渦狀或柵欄狀,。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合,，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點,。 5.方法簡介： 實驗室分離的人冠狀動脈平滑肌細胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的人冠狀動脈平滑肌細胞經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-H167 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)成纖維細胞樣 傳代特性可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%,；CO2，5% |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄，易碎,，取放蓋玻片時動作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率,；
5．如果細胞貼壁生長能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大小,；
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2,、PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細胞30min；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5,、PBS沖洗細胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
GM-CSF 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)(表達載體), 帶Myc標簽
大鼠 GDF5 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
大鼠 ACVR1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
小鼠 NOG / Noggin 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶HA標簽
小鼠 NOG / Noggin 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽
小鼠 TREM2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
小鼠 ALK-3 / BMPRIA 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽
小鼠 ALK-6 / BMPR-IB 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽
PKM2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
CD3E 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
冠狀動脈平滑肌細胞花生四烯酸15脂氧合2抗體Anti-NOGOR(RTN4R) Antibody動態(tài)顯色法內(nèi)素定量試劑盒48 次圖片
硫氧還蛋白還原抗體Anti-Nogo A/RTN4 AntibodyPCR 抑制物清除劑1mL圖片
5-羥色受體2C抗體Anti-NOL3 Antibody硅膠膜離心吸附柱再生液500 次規(guī)格
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